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小鼠ELISA試劑盒細(xì)胞活性的定義具有多樣性,通過對(duì)關(guān)鍵的細(xì)胞生理指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記來進(jìn)行檢測(cè),如細(xì)胞代謝的活性(酯酶的功能,MTT法)、凋亡標(biāo)記物(Annexin V)、細(xì)胞氧化還原電位、膜電位、增值率(DNA含量)、線粒體功能和膜的完整性等。雖然有如此多的指標(biāo)參數(shù),但是基于對(duì)細(xì)胞膜的完整性和相關(guān)的染料排斥發(fā)檢測(cè),已經(jīng)被廣泛的認(rèn)為是作為細(xì)胞活性檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用廣泛的細(xì)胞膜完整性的檢測(cè)方法是臺(tái)盼藍(lán)染色法,該法早是基于顯微鏡下觀測(cè)并且手工計(jì)數(shù),過程費(fèi)事費(fèi)力,并且計(jì)數(shù)的系統(tǒng)誤差較大。為了排除人工計(jì)數(shù)的誤差,增加計(jì)數(shù)過程的準(zhǔn)確性,出現(xiàn)了基于儀器放大、拍照計(jì)數(shù)的方法。這樣提高了計(jì)數(shù)過程的自動(dòng)化程度,但是依舊無法擺脫由于計(jì)數(shù)時(shí)焦平面的選擇、顆粒識(shí)別的準(zhǔn)確性問題,并且容易高估細(xì)胞活性。為了解決這些問題,一些熒光染料被發(fā)明進(jìn)行使用。該法能夠較臺(tái)盼藍(lán)染色提高100倍或者更高的檢測(cè)準(zhǔn)確性與靈敏度。這類型的熒光染料中,碘化丙啶(Propidium Iodidi,PI)是應(yīng)用廣泛的一種標(biāo)準(zhǔn)染料。
與其他基于熒光染料標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)一樣,該法的缺點(diǎn)就是需要使用熒光顯微鏡或者是流式細(xì)胞儀。前者要求配置一套熒光顯微鏡,相對(duì)應(yīng)的激發(fā)光源以及濾光片,并且操作過程依舊是手工操作,人工計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果,過程耗時(shí)還無法避免人為的主觀因素。而流式細(xì)胞儀能夠準(zhǔn)確的計(jì)數(shù),并且進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,但是設(shè)備昂貴,需要有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行專門操作,以及需要一定的設(shè)備維護(hù)等問題。
Orflo公司創(chuàng)新性的出了臺(tái)便攜的流式檢測(cè)系統(tǒng),能夠提供高精度的PI活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),儀器無需預(yù)熱,無需清潔與維護(hù),檢測(cè)快速,不需要專門的儀器操作人員和相關(guān)背景知識(shí)的人員。Moxi Flow是世界上臺(tái)結(jié)合庫爾特原理(顆粒計(jì)數(shù)和粒徑分析)和單熒光通道(PMT)檢測(cè)的便攜流式。本文中將對(duì)幾種不同的細(xì)胞活性檢測(cè)方法進(jìn)行比較。
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