人正常組織來源細胞消化的一般程序步驟，細節操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如有不妥之處，歡迎指正，一起討論：

1. 絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。

2.什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養就是一個一個分開）。細胞只要能從基質上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者象有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現。

3.另一個帖子里提到一個比較復雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是*次聽說，應該是網友自己發展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養過的近300株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養好，這個視細胞而定。如果和標準形態不一致，那可能是自己沒消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至*吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好。

4.比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以coloncancer為例，比如HCT15,LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

5，常規的細胞實驗（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化（難消化細胞例外）即可。但少數實驗，比如病毒包裝，對細胞代數，對細胞狀態要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對人正常組織來源細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數一多，細胞包裝能力就會逐漸下降（當然也有其它因素影響包裝效率）。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白。

1 x 10^6 cells/vial 人小腦顆粒細胞 HCGC

1 x 10^6 cells/vial 人海馬趾神經細胞 HN-h

1 x 10^6 cells/vial 人少突膠質前體細胞-貼壁生長 HOPC

5 x 10^6 cells/vial 人少突膠質前體細胞-懸浮生長 HOPC-os

1 x 10^6 cells/vial 人少突膠質細胞 HO

1 x 10^6 cells/vial 人星形膠質細胞 HA

5 x 10^6 cells/vial 人星形膠質細胞 HA

10 x 10^6 cells/vial 人星形膠質細胞 HA

5 x 10^5 cells/vial 人小腦星形膠質細胞 HA-c

5 x 10^5 cells/vial 人脊髓星形膠質細胞 HA-sp

5 x 10^5 cells/vial 人海馬星形膠質細胞 HA-h
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