ATCC細胞實驗目的

1.  掌握IL-2生物學活性測定的原理。
2.  熟悉IL-2生物學活性測定的實驗方法和結果計算。

實驗原理

IL-2是由Th細胞產生的淋巴因子，在淋巴細胞增殖分化過程中起到非常重要的作用。IL-2活性測定基于IL-2能維持IL-2依賴細胞的代謝和存活，促進這類細胞的增殖。細胞在增殖時能量代謝活躍，可產生大量的能量以供合成多種大分子物質和細胞分裂所需，能量代謝的水平與細胞合成DNA水平基本平行，因此，測定細胞能量代謝的水平可以間接地反映細胞增殖情況。

MTT（四甲基偶氮唑鹽）是一種淡黃色的水溶性化合物，活細胞（特別是增殖期的細胞）通過線粒體能量代謝過程中的琥珀酸脫氫酶的作用，使淡黃色的MTT分解產生藍色結晶狀甲臢沉積于細胞內或細胞周圍，且形成甲臢的量與細胞增殖程度呈正比，甲臢經SDS作用后可溶解顯色。溶解液的光密度值與細胞代謝及IL-2活性正相關。

實驗材料

1.  1640培養(yǎng)液（*）、IL-2標準品、待測IL-2樣品、CTLL-2細胞株、MTT溶液（5mg/ml）、10%SDS
2.  96孔細胞培養(yǎng)板、多頭細胞收集器、微量加樣器、CO2孵箱、酶標儀

實驗方法

1.  制備CTLL-2細胞懸液  取生長旺盛的CTLL-2細胞，用1640培養(yǎng)液將細胞洗3次，用*1640培養(yǎng)液配成2×105/ml細胞懸液。
2.  稀釋樣品和標準品  將待測樣品和標準IL-2用*1640培養(yǎng)液做一定的倍比稀釋。
3.  加樣與檢測  向96孔細胞培養(yǎng)板內加入不同稀釋度的樣品和標準品（50μl/孔），每稀釋度3個復孔，并設細胞對照。再向各孔加入50μl細胞懸液，混勻，置5%CO237℃培養(yǎng)36小時，每孔加入MTT溶液20μl CO2孵育6～8小時后，每孔再加10%SDS100μl，充分混勻，37℃孵箱靜放（使甲臢全溶解）。在酶聯(lián)儀上選波長570nm測定OD值，將待測樣品的OD值與標準品OD值比較后，求得待測樣品的IL-2活性單位。

結果計算

將各稀釋度的OD值按照樣品Z大增殖OD值的百分比換算成概率單位，可將原來呈S形的曲線轉換成為直線。根據(jù)這些點的數(shù)據(jù)求出各直線的回歸方程。再從回歸方程求出各樣品達50%Z大增殖時的稀釋度，然后按公式求出待測樣品IL-2的活性單位。

ATCC細胞注意事項

1.  MTT液要現(xiàn)配現(xiàn)用，避免光照，若有藍色顆粒需過濾后再用。
2.  生物學測定法敏感性高，特異性強，所測IL-2是具有生物活性的IL-2，而不象免疫學測定法所測定免疫反應性IL-2蛋白，因此測定的條件和要求要嚴格按規(guī)程。

15mg 氫溴酸加蘭他敏外消旋體標準品 193146-85-9 

15mg 卡維地洛相關物質E標準品 1836-62-0

15mg 格拉司瓊相關物質C標準品 141136-01-8 

15mg 阿巴卡韋相關物質混合物標準品 136470-78-5

15mg 乙胺丁醇相關物質B標準品 134566-79-3

15mg 奈韋拉平相關物質A標準品 133627-17-5 

15mg 色氨酸相關物質A標準品 132685-02-0 

15mg 替莫唑胺相關物質B標準品 13114-72-2 

15mg 帕羅西汀相關物質C標準品 130855-30-0 

Fluvastatin Related Compound B 15mg 氟伐他汀鈉相關物質B標準品 129332-29-2 
ATCC細胞