細胞簡介：

兔神經小膠質細胞分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(灰質)覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面(約占整個皮質面積的1/3)、內側面和底面(占2/3的面積)；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質細胞是神經膠質細胞的一種，相當于腦和脊髓中的巨噬細胞，是中樞神經系統(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防線。小膠質細胞大約占大腦中的神經膠質細胞的20%，小膠質細胞不停地清除著中樞神經系統中的損壞的神經，斑塊及感染性物質。無數臨床上和神經理學研究表明激活的小膠質細胞在神經退化類疾病的發病機理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發性硬化和阿茲海默癥等。但是過多激活或失控的小膠質細胞會引起神經毒性。它們是促炎因子和氧化應激的重要來源，如腫瘤壞死因子(TNF)，一氧化氮，白介素等有神經毒性的物質。神經小膠質細胞的主要功能：①神經膠質出現在大腦發育早期向成熟階段轉化的過程中；②當程序性細胞死亡時，或在大腦發育的過程中，中樞神經系統受損或受到病理損壞時，神經膠質可做為大腦的巨噬細胞；③膠質細胞能在Ⅱ類組織相容性復合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原，能進行Fc介導的巨噬作用，并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。
方法簡介：

實驗室分離的兔神經小膠質細胞采用酶消化法結合差速貼壁法，在培養基營養缺失數天后經搖床震蕩收集脫落細胞制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

實驗室分離的兔神經小膠質細胞經CD11b免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養瓶中，倒置于細胞培養箱中，

4) 2h后，培養瓶中注入2 mL內皮培養基，小心將培養瓶正置于培養箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或過夜，以穩定細胞狀態，然后換用新鮮培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。