細胞簡介：

人神經星形膠質分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經星形膠質細胞，是哺乳動物腦內分布廣泛的一類細胞，也是膠質細胞中體積最大的一種。用經典的金屬浸鍍技術（銀染色）顯示此類膠質細胞呈星形，從胞體發出許多長而分支的突起，伸展充填在神經細胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經細胞的作用。細胞突起的末端常膨大形成腳板或稱終足，有些腳板貼附在鄰近的毛細血管壁上，因此這些腳板又被稱為血管足或血管周足，靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內表面，彼此連接構成膠質界膜。細胞剛分離時呈圓形，24h后大部分細胞貼壁，均勻分布于瓶底，部分細胞伸出細小突起，培養4-5d后細胞數量明顯增多，呈扁平、多角形，胞質豐富且核漿較少，細胞核呈橢圓形，偏于胞體一側。神經星形膠質細胞是中樞神經系統的重要細胞組成，不僅具有支持功能，還能夠合成及分泌多種神經活性物質，在維持神經元內外環境、生存、遷移、免疫調節、信號轉導、軸突生長及功能整合等方面具有重要作用。
方法簡介：

公司實驗室分離的人神經星形膠質采用酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的人神經星形膠質經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養瓶中，倒置于細胞培養箱中，

4) 2h后，培養瓶中注入2 mL內皮培養基，小心將培養瓶正置于培養箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或過夜，以穩定細胞狀態，然后換用新鮮培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。