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EPI300 感受態細胞100ul*10規格

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所  在  地上海市

更新時間:2019-03-09 21:27:56瀏覽次數:290次

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生化檢測試劑盒
科研細胞
原代細胞
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產地 進口 加工定制
適用領域 其他
EPI300 感受態細胞100ul*10規格取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養12-16小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,如轉化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉化產物涂板;反之,如轉化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉化產物涂板。

使用說明:
1. EPI300 感受態細胞100ul*10規格取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養45~60min使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12~16h。


培養方法:
EPI300 感受態細胞100ul*10規格收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況,如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,留10ml培養液繼續培養。
培養實驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養基混勻分瓶,T25瓶中加培養基至6-8ml,T75瓶加培養基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養。

ELISA Kit for Human Beta-defensin 124

96T31.2-2000 pg/mL人核心蛋白聚糖(Decorin)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Decorin

96T62.5-4000 pg/mL人組織相關蛋白3(DKK3)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Dickkopf-related protein 3

96T0.312-20 ng/mL人纖毛軸動力蛋白重鏈17(DYH17)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Dynein heavy chain 17, axonemal

96T0.156-10 ng/mL人Dickkopf 相關蛋白4(Dickkopf-4)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Dickkopf-related protein 4

96T78-5000 pg/mL人Dickkopf樣蛋白1(Dickkopf-like protein 1)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human Dickkopf-like protein 1

96T0.156-10 ng/mL人損傷調節自噬調節蛋白1(DRAM1)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human DNA damage-regulated autophagy modulator protein 1

96T0.156-10 ng/mL人DnaJ同系物亞科C成員27(DNAJC27)ELISA試劑盒人

ELISA Kit for Human DnaJ homolog subfamily C member 27
EPI300 感受態細胞100ul*10規格48T口蹄疫病毒Asia-1亞型(FMDV-A1)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T口蹄疫病毒Asia-1亞型(FMDV-A1)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

48T口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

48T口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

48T口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

48T口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

48T豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

48T豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

48T高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

48T高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T高致病性豬藍耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

48T豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
中文名稱:EPI300 感受態細胞100ul*10規格
規格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)  
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋
操作方法:
一 、EPI300 感受態細胞100ul*10規格熱激轉化法
1.    從-80℃冰箱取出感受態細胞冰浴融化后,吸取100μl感受態細胞轉移到-20℃過夜預冷的搖菌管中,加入質粒或連接產物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2.    42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3.    向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養基可提高2-3倍轉化效率),37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。
4.    根據實驗要求(質粒,重組連接產物轉化),吸取不同體積已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平       板,37℃過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。
二、10分鐘快速轉化法                             
注:在使用卡那霉素,四環素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養基中復蘇以提高轉化效率,當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉移到37℃預熱的LB培養基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。
2. DH 5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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