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小鼠牙乳頭細(xì)胞

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-19 11:18:22瀏覽次數(shù):157次

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原代細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)
貨號(hào) GOY-01X1080
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產(chǎn)品名稱

小鼠牙乳頭細(xì)胞

規(guī)格

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

分類

原代細(xì)胞

貨號(hào)

GOY-01X1080

商品介紹:

名稱 小鼠牙乳頭細(xì)胞

2.組織來(lái)源:牙乳頭組織

3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

小鼠牙乳頭細(xì)胞分離自牙乳頭組織;牙乳頭細(xì)胞來(lái)源于外胚間充質(zhì),具有多向分化潛能,是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞,該細(xì)胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復(fù)過(guò)程中起重要作用。牙乳頭細(xì)胞為未分化的間充質(zhì)細(xì)胞,有少量微細(xì)的膠原纖維分散在細(xì)胞外間隙。在鐘狀期,被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多,并出現(xiàn)細(xì)胞的分化。在內(nèi)釉上皮的誘導(dǎo)下,牙乳頭外層細(xì)胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細(xì)胞。這些細(xì)胞在切緣或牙尖部為柱狀,在牙頸部細(xì)胞尚未分化成熟,為立方狀。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用。現(xiàn)已證明,牙乳頭是決定牙形狀的重要因索。例如,將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合,結(jié)果形成磨牙;與此相反,切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合,結(jié)果形成切牙。牙乳頭還可以誘導(dǎo)非牙源性的口腔上皮形成成釉器。

5.方法簡(jiǎn)介:

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠牙乳頭細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠牙乳頭細(xì)胞經(jīng)DMP免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、PenicillinStreptomycin

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M125

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形

傳代特性可傳1-2

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%CO25%

使用方法:

收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;

3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

 

培養(yǎng)操作:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;

1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

1g 潮 B Hygromycin B 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 12

50T 藍(lán)舌病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Retinoic acid receptor RXR-beta

5mL 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2 Growth Factor For Ce

小鼠牙乳頭細(xì)胞1瓶 SF-295細(xì)胞株 SF-295 低溫運(yùn)輸和保存

50T 豬鏈球菌Ⅱ型PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

ISP培養(yǎng)基3 ISP Medium 250g

50g 聚乙烯聚吡咯烷酮 Polyvinylpolypyrrolidone(PVPP) 室溫干燥保存

250mL RIPA Buffer with EGTA  RIPA Buffer with EGTA  常溫保存

100mL TE Buffer,100X,pH7.4 TE Buffer,100X,pH7.4 常溫保存

Rabbit Anti-Biotin/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlAdducin protein  內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml

RLLM1/C14orf166  胰轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白R(shí)LLM1抗體 規(guī)格: 0.2ml

DBC1/deleted in bladder cancer 1  膀胱缺失基因1 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-c-Kit(Ser721)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml

FASTKD1  Fas活化激結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlAPPL1  銜接因子蛋白含pH域磷酸結(jié)合域和拉鏈蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CRP(C11F2)  C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlMLL5  髓系/淋巴混合譜系白蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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