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測定意義

H2O2是生物體內最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細胞內核酸，蛋白質等生物大分子，并使細胞膜遭受損害，從而加速細胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應急反應中的關鍵調節因子。

測定原理：

H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物，在415nm有特征吸收。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

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過氧化氫（H2O2）微量法檢測試劑盒三化釕 水合物 38.0-42.0% Ru basis犬類風濕因子(RF)免疫試劑盒因子受體抗體NAT10  乙酰轉移10抗體

氧化銀 AR,99.7%  犬抗利尿激素/血管/精氨(AVP)免疫試劑盒Ets轉錄因子家族ets1抗體NARG2  谷氨受體調節蛋白2抗體

氧化銀 CP,99.0% 犬抗狂犬病(RV)抗體免疫試劑盒早期B淋巴因子1抗體NARF  核纖層蛋白A識別因子抗體

化銀 AR,99.5%犬巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒內皮素受體A抗體NAPSIN A/ASP4  天冬氨蛋白ASP4抗體

硝銀 AR,99.8%犬結締組織生長因子(CTGF)免疫試劑盒因子受體抗體NAP1L2  腦特異性蛋白BPX抗體

硝銀 99.99% metals basis犬結蛋白(Des)免疫試劑盒因子受體抗體NAP1L1  核小體組裝蛋白1抗體

硝銀  ACS, ≥99.0%犬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒早期生長應答蛋白1抗體Nanos3  骨巢蛋白抗體

硝銀標準溶液 0.1017mol/L犬降鈣素原(PCT)免疫試劑盒表皮膜蛋白1抗體NANOS2  增殖相關蛋白NANOS2抗體

硝銀標準溶液 0.1000mol/L(0.1N)犬降鈣素(CALCA)免疫試劑盒內皮受體蛋白酪氨激A抗體（腫瘤壞死因子α誘導蛋白4）NANOGP8  干轉錄因子NANOGP8抗體

硝銀標準溶液 0.01000mol/L(0.01N)犬堿性(ALP)免疫試劑盒酪氨蛋白激A4抗體Nanog  胚胎干關鍵蛋白抗體

氧化銀 99.99% metals basis犬狀腺素(T4)免疫試劑盒前列腺素E受體3抗體NALP6  富含亮氨重復結構域蛋白6抗體

二四氨鈀 Pd ≥43.0%犬狀旁(PTH)免疫試劑盒雌激素受體α抗體NALP4  癌/抗原58抗體

硝 99.5%（劇品）犬質金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)免疫試劑盒ENPP3抗體IgGNALP2/PAN1/PYPAF2  富含亮氨重復結構域蛋白2抗體

硝 99.999%（劇品）犬質金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒絲裂原活化蛋白激1/2抗體NALP12  NALP12抗體

硝 98%（劇品）犬質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒胚胎干RAS蛋白抗體NAIP  神經凋亡抑制蛋白抗體

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。