實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    喉表皮樣癌細(xì)胞：HEp-2 

別稱Hep-2; HEP-2; Hep 2; Hep2; HEp2; HEP2; H.Ep.-2; H.Ep. #2; H.Ep. No. 2; Hep II; Human Epidermoid carcinoma #2; Human Epithelioma-2

年齡（性別）30歲

組織來源起源HeLa細(xì)胞污染

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述最初認(rèn)為，HEp-2細(xì)胞源自喉上皮癌，但隨后通過同功酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，HEp-2細(xì)胞的起源是HeLa細(xì)胞污染的。HEp-2細(xì)胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。(STR檢測位點(diǎn)同HELA)

生物安全等級2

生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達(dá)情況keratin, The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。

食蟹猴 PDGFRB 基因全長ORF克隆

食蟹猴 KLRC1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ITGA1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ACE2 基因全長ORF克隆

食蟹猴 LIFR 基因全長ORF克隆

食蟹猴 SEMA4D 基因全長ORF克隆

食蟹猴 LAMP2 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IFNGR1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 THY1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 LILRA4 基因全長ORF克隆

喉表皮樣癌細(xì)胞：HEp-2 2 ug pLenti4/V5-GW/lacZ pLenti4/V5-GW/lacZ 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

AVPR2  氨酸加壓素受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Synaptotagmin 5  突觸結(jié)合蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

HMGA1/HMG-I/HMG-Y  高遷移率族蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.2mlKLLN   Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39)  磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.1mlCXCL16  CXC趨化因子16抗體 規(guī)格: 0.1ml

2 ug pIRES pIRES 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

志賀氏菌顯色培養(yǎng)基  1000ml

Ninjurin 2  神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

PTHrP/PTHLH  甲狀旁激素相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

250g 干粉型SB培養(yǎng)基 SB Medium Powder 常溫

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存

雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 Double Lactose Bile Medium 250g