細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

公司細胞現貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。

商品介紹：

使用方法：

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

培養操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

人 CD84 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 CD5 antigen-like 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD55 / DAF 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD48 / BCM1 / SLAMF2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD45 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD34 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD34 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人

濾泡狀甲狀腺癌細胞：FTC-133 2 ug pRetro-on-RFP pRetro-on-RFP 低溫運輸，-20℃保存

0.5%葡萄糖肉湯培養基（2015藥典） 0.5% Glucose Brother Medium 250g

50T 巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

phospho-LRP1(Ser4523)  磷酸化脂蛋白受體相關蛋白1抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/FITC  FITC標記的兔抗人IgG F(ab')2  規格: 0.1mlDPH2  白喉酰胺生物合成樣蛋白2抗體 規格: 0.2ml

UBE2M  泛素蛋白連接M抗體 規格: 0.2ml

Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗小鼠IgM 規格: 0.1ml

PARP  多苷二磷酸多聚抗體/多聚ADP-核糖聚合1 規格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG  羊抗大鼠IgG 規格: 1mg

Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167)  磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體 規格: 0.1mlCD167b/DDR2  盤狀結構域受體蛋白2抗體 規格: 0.2ml

BAT5  白細胞抗原B相關轉錄蛋白5抗體 規格: 0.2ml

Nephrin  小球細胞粘附分子受體抗體 規格: 0.1ml