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總糖含量可見分光光度法檢測試劑盒

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更新時(shí)間:2022-04-27 14:28:13瀏覽次數(shù):177次

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生化檢測試劑盒
科研細(xì)胞
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貨號 GOY-01S6768
總糖含量可見分光光度法檢測試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:載玻片細(xì)胞βAMYLOID蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
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冰凍切片組織βAMYLOID蛋白表達(dá)NBT顯色

28.png

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

總糖含量可見分光光度法檢測試劑盒

規(guī)格

50管/48樣

檢測方法

可見分光光度法

貨號

GOY-01S6768

商品介紹:

測定意義

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質(zhì)等。

測定原理:

總糖酸水解為還原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物,在過量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色,在540nm處有最大吸收峰,以此測定樣品中的總糖含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔510分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

2,4-二氯氟苯  99%甘油 for electrophoresis, ≥99%MC Ab(Human melanocyte antibody) ELISA Kit  人黑色素抗體

3,4-二甲氧基苯甲 99%甘油 EP, BP, JP, USP級TFR/CD71(Human transferrin receptor) ELISA Kit  人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體

對苯 AR,98.5%  甘油 分析標(biāo)準(zhǔn)品P53(Human p53/tumor protein) ELISA kit  人P53

間甲 98%薄層層析硅膠 G60Human Cyclin-D3 ELISA Kit  人周期素D3

鄰苯二甲酰氯 90%薄層層析硅膠 H60Human Cyclin-D2 ELISA Kit  人周期素D2

鄰苯二甲酰氯 98%薄層層析硅膠 GF254 60Human Cyclin-D1 ELISA Kit  人周期素D1

對苯二甲酰氯 99%薄層層析硅膠 HF254 60ES(Human Endostatin) ELISA Kit  人內(nèi)皮抑素

對苯二甲酰氯 97%聚乙二單甲 均分子量350 FE(Human ferritin) ELISA Kit  人鐵蛋白

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操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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