實驗操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞：K7M2 wt(K7M2-WT)

別稱K7M2 wt; K7M2

種屬小鼠

年齡（性別）成年

組織來源品系：BALB/c；器官：骨；疾病：骨肉瘤；來源轉(zhuǎn)移灶：肺；細(xì)胞類型：成骨細(xì)胞

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)成骨細(xì)胞樣

背景描述K7M2 wt [K7M2-WT]細(xì)胞抗原表達(dá)：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調(diào)素的表達(dá)顯示K7M2 wt [K7M2-WT]細(xì)胞骨家族細(xì)胞特性。

生物安全等級1

生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~31小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, forms tumors in BALB/c mice with spontaneous metastasis to the lungs in over 90% of mice inoculated.

抗原表達(dá)情況CD31+

基因表達(dá)情況secreted phosphoprotein 1 (osteopontin); factor VIII

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

人 PBEF / Visfatin / NAMPT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 PPARG / Nr1c3 / PPARgamma 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CMA1 / Chymase 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 IL17RC (aa 1-454) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 IFNα4 / IFNa4 / Interferon alpha-4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞：K7M2 wt(K7M2-WT)CDCA3  細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

TGF Beta R1/TGFBR1  轉(zhuǎn)移生因子β受體1抗體（TGF-βRⅠ） 規(guī)格: 0.2ml

Salmonella typhimurium  鼠傷寒 0.2ml

Phospho-GSK3 alpha(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激3α抗體 GSK3α(Phospho-Ser21) 規(guī)格: 0.1mlCD303/BDCA-2  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體 規(guī)格: 0.2ml

SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein  多糖核心蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Rb(Ser612)  磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

50次 柱式酵母質(zhì)粒DNAout Yeast Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)

1瓶 NCI-H1688細(xì)胞株 NCI-H1688 低溫運輸和保存

50T 人黏附分子CD44基因PCRPCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

1mL C溶液,5mg/mL Mitomycin Solution  4℃避光保存

2 ug pET-42b(+)   pET-42b(+)   低溫運輸，-20℃保存