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猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞:RF/6A
貨號 | GOY-01X0378 |
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 乳腺癌細胞:MDA-MB-157 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0378 |
商品介紹:
名稱 乳腺癌細胞:MDA-MB-157 別稱MDA-MB157; MDAMB157; MDA-157; MDA157; MB 157; MB157; MD Anderson-Metastatic Breast-157 年齡(性別)女;44歲 組織來源乳腺;乳房/髓質(zhì) 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述MDA-MB-157細胞源自一位患有乳腺髓樣癌的44歲黑人女性;MDA-MB-157細胞表達WNT7B癌基因,細胞與細胞邊界處有細胞橋粒、微絨毛、張力細絲。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,100% 溫度:37℃ 致瘤性Yes, in nude mice and in immunosuppressed BALB/c mice. 抗原表達情況Blood Type B; Rh- |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 CDKL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SCF / C-kit ligand 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 GAD67 / GAD1 桿狀病毒-昆蟲細
乳腺癌細胞:MDA-MB-157 2 ug pMAL-p5E pMAL-p5E 低溫運輸,-20℃保存
緩沖甘油-氯化鈉溶液 Buffered glycerol - Sodium Chloride Solution 250g
100U 化的β- 半乳糖苷 Biotin-β-Galctosidase -20℃保存
500mL Blotto-Antifoam in TBS Blotto-Antifoam in TBS 常溫保存
牛膽鹽 Bile Salt 100g
10mg 牛甲狀腺素蛋白 Thyroglobulin Bovine -20℃保存
250mL Succinate Buffer(琥珀酸緩沖液),0.2M,pH6.0 Succinate Buffer,0.2M,pH6.0 常溫保存
豬支原體培養(yǎng)基 Pig Mycoplasma Base 250g
RNF14 環(huán)指蛋白14抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
BPGM 紅細胞2,3 - 二磷酸甘油酸合成抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3 Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml
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