操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

商品屬性：

商品介紹：

測定意義

α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解，主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要，種子萌發(fā)初期，其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗，為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源，后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。

測定原理：

α-GAL分解對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算α-GAL活性。

自備用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵 97%2-氟-5-羥基吡 95%Anti-CKMT2/FITC  熒光素標(biāo)記肌酸激2抗體IgG

2-溴-3-辛基噻吩 97%3-氟-5-羥基吡 97%Anti-CKIP-1/FITC  熒光素標(biāo)記酪蛋白激2相互作用蛋白1抗體IgG

3-溴噻吩 97%3-氟-2-羥基吡 97%Anti-CKLFSF2(human)/FITC  熒光素標(biāo)記人類新因子/趨化素樣因子超家族成員2抗體IgG

2-溴-3-甲基噻吩 99%2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸 98%Anti-CLCA4/FITC  熒光素標(biāo)記鈣激活氯離子通道4抗體IgG

1,4-雙(二苯膦基)丁烷 96%2-氟-3-羥基吡 97%Anti-CLDN1/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白1抗體(C端)IgG

雙(三苯基膦)氯化鎳(Ⅱ) 98%4-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CLDN1/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白1抗體IgG

[1,3-雙（二苯膦基）烷]二氯化鈀 Pd 18%4-羧基苯肼鹽酸鹽 98%Anti-ocludin-5/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白-5抗體IgG

2-溴芴 97%2-肼基苯甲酸鹽酸鹽 98%Anti-CLDN3/Claudin 3/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白3抗體IgG

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