進口原裝elisa試劑盒用純化的IL-4抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的IL-4抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。
小鼠白介素4 Mouse（IL-4）ELISA試劑盒操作步驟
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效
性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、 每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色（反應(yīng)時間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。
7、 進口原裝elisa試劑盒每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。
 
小鼠白介素4 Mouse（IL-4）ELISA試劑盒注意事項
1、 試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進行實驗。
3、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時應(yīng)嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4、 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請 配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10），以避免由于不準(zhǔn)確稀  釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。
6、 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、 進口原裝elisa試劑盒底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。