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豬細小病毒抗體(PPV-Ab)elisa檢測試劑盒技術參數

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豬細小病毒抗體(PPV-Ab)elisa檢測試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中細小病毒抗體(PPV-Ab)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬細小病毒抗體(PPV-Ab)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中細小病毒抗體(PPV-Ab)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬細小病毒抗體(PPV-Ab)的存在與否。
試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
豬細小病毒抗體(PPV-Ab)elisa檢測試劑盒計算和結果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.20
臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為細小病毒抗體(PPV-Ab)陰性
陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為細小病毒抗體(PPV-Ab)陽性。
注意事項
1.操作嚴格按照進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須
注意安全。
豬細小病毒抗體(PPV-Ab)elisa檢測試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月

 

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