Y190 感受態細胞操作方法：  

1.Y190 感受態細胞100ul*50規格取100μl冰上融化的DH5α感受態細胞，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。  隨后，為了確保DNA能夠有效進入感受態細胞，我們需要執行一個關鍵的熱激步驟。將含有DNA的感受態細胞混合物迅速轉移到預先加熱至42°C的水浴中，精確計時90秒。這一短暫的高溫處理能夠暫時性地改變細胞膜的通透性，允許外源DNA通過。完成熱激后，立即將試管重新放回冰上，靜置2-3分鐘，使細胞膜恢復其原有的穩定性，防止DNA的泄漏。

接下來，為了復蘇細胞并表達抗性基因（如果質粒攜帶的話），需要向管中加入800μl無抗生素的LB培養基，并置于37°C搖床中，以200-250rpm的速度溫和振蕩培養45分鐘至1小時。此過程中，細胞開始分裂并表達任何可能已轉入的質粒上的基因，包括可能賦予抗生素抗性的基因。

培養結束后，根據實驗需求，我們可以將細胞懸液進行適當稀釋，然后取一定體積（如100μl）涂布到含有相應抗生素的LB瓊脂平板上。使用無菌的玻璃涂布器輕輕均勻地涂抹，確保細胞均勻分布。之后，將平板倒置放在37°C恒溫培養箱中培養過夜，通常為12至16小時。

次日，觀察平板上菌落的形成情況。如果轉化成功，我們將看到清晰可見的、大小均一的菌落生長，這些菌落即為成功導入了目的DNA的DH5α細胞克隆。至此，感受態細胞的轉化實驗便告一段落，接下來的步驟將根據實驗目的進行質粒提取、酶切驗證或進一步的分子生物學分析。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。  

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。  

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應  

抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.Y190 感受態細胞100ul*50規格感受態細胞在冰上融化。  

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。  

3.轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少終用于涂板的菌量。