流感病毒N1亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）反應流程常規程序:

將PCR反應所需的成分配置完后，在PCR儀上于94-96℃預加熱幾十秒至幾分鐘，使模板DNA充分變性，然后進入擴增循環。在每一個循環中，先于94℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度（一般50-60℃之間），一般保持30秒鐘，使引物與模板充分退火；在72℃保持1分鐘（擴增1kb片段），使引物在模板上延伸，合成DNA，完成一個循環。重復這樣的循環25～35次，使擴增的DNA片段大量累積。最后，在72℃保持3-7min，使產物延伸完整，4℃保存。

2．復性（退火）和延伸溫度

復性的溫度是PCR擴增是否順利的關鍵因素，通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數設定為72℃。如果復性的溫度很高，可以將延伸溫度和復性溫度設置成同一溫度，變成二步法PCR。

3．反應時間

變性步驟一般使用30秒鐘，如果模板的G+C含量較高，或直接用細胞做模板，變性時間可適當延長。復性時間有30秒種一般是足夠的。延伸時間由擴增產物的大小決定，一般采用1kb用1分鐘來保證充足的時間。

4．循環次數

循環次數主要與模板的起始數量有關，在模板拷貝數為104～105數量級時，循環數通常為25～35次。

平臺效應（plateaueffect）：PCR擴增過程后期會出現的產物的積累按減弱的指數速率增長的現象。原因：底物和引物的濃度已經降低，dNTP和DNA聚合酶的穩定性或活性降低，產生的焦磷酸會出現末端產物抑制作用，非特異性產物或引物的二聚體出現非特異性競爭作用，擴增產物自身復性，高濃度擴增產物變性不ce底。

5．PCR反應液的配制

PCR反應體系的配置方式有時也會影響反應的正常進行。常規方法與其它酶學反應一樣，在最后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子，要求在反應液上覆蓋一層礦物油，防止水分蒸發。

對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時，有時會擴增不出產物。在遇到這個問題時，如果將反應成分分開配制，A管含模板、引物和dNTP，以及調整體積的H2O，B管含緩沖液、DNA聚合酶和水，然后再將兩管溶液混合起來，可較好地克服這個問題。

次亞麻酸甲酯/γ-亞麻酸甲酯/次亞麻酸子甲酯/次亞麻子油酸甲酯/(順,順,順)-6,9,12-十八碳三烯酸/γ-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯/γ-Linolenic acid methyl esterFGC，98.5%5毫升EMK原裝

亞麻酸甲酯/順-9，12，15-十八碳三烯酸甲酯/9,12,15-十八碳三烯酸甲酯/(順,順,順)-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯/Methyl linolenateAR，70%10毫升國產/進口

1，2-丙二醇/1,2-二羥基丙烷/甲基乙二醇/丙二醇/1,2-PropanediolAR，99%500毫升國產/進口

戊二醛/1，5-戊二醛/GlutaraldehydeBR，25-28%100毫升國產

多聚甲醛/聚合甲醛/仲甲醛/固體甲醛/ParaformaldehydeCP，94%，500克國產/進口

DL-酒石酸/葡萄酸/消旋酒石酸/二羥基丁二酸/外消旋酒石酸/二羥基琥珀酸/酒石酸/(R*,R*)-(±)-2,3-二羥基丁二酸/DL-2,3-二羥基丁二酸/DL-(-)-酒石酸/(2R,3R)-2,3-二羥基, 1,4丁二酸/DL-Tartaric acidAR，99%100克國產/進口

D-酒石酸/右旋酒石酸/2,3-二羥基丁二酸/葡萄酸/二羥基琥珀酸/D-2,3-二羥基琥珀酸/D-2,3-二羥基丁二酸/D-Tartaric acidAR，99%100克國產/進口

順-15-二十四碳單烯酸/神經酸/順-15-二十四碳烯酸/鯊油酸/二十四烯酸/Nervonic acidBR，99%100毫克國產/進口

草酸/二水合乙二酸/蓚酸/Oxalic acid dihydrateGR，99.8%，500克國產/進口

丹寧酸/鞣酸/單寧酸/炭尼酸/沒食子鞣酸/鞣質/沒食子鞣酸/柔酸/單寧/二倍酸/落葉松栲膠/Tannic acidAR500克國產/進口

鉬酸/Molybdic acidGR，99%100克國產/進口

硅酸/含水二氧化硅/矽酸/ Silicic acidAR500克國產/進口

硅鎢酸/鎢硅酸/硅鎢酸水合物/Silicotungstic acid hydrateAR100克國產/進口

鎢酸/Tungstic acidGR500克國產/進口

乙炔-1,2-二羧酸/丁炔二酸/乙炔二羧酸/2-丁炔二酸/2-Butynedioic acidBR，97%，5克進分

α-溴異丁酸/2-溴-2-甲基丙酸/2-溴異丁酸/α-溴代異丁酸/α-Bromoisobutyric acidBR，98%，25克國產

1-乙基-3-（3-二甲氨丙基）碳二亞胺鹽酸鹽/1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽/1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽/1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽/1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽/EDC•HC1/EDAC•HC1特純，99%1、10、25、100克國產/進口