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犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa KitCanine Tumor necrosis factor α，TNFα ELISA Kit
犬腫瘤壞死因子αElisa Kit多少錢【實驗用途】Tumor necrosis factor α，TNFα，腫瘤壞死因子α。TNFα前體是以跨膜蛋白的形式存在于細胞內，在細胞外被剪切成17KDa的成熟形態（157個氨基酸）。活性的TNFα以非共價鍵二聚體、三聚體甚至五聚體的形式存在，但在SDS-PAGE顯示為單一17KDa條帶。很多細胞都能合成TNFα，包括各種免疫細胞（單核細胞、巨噬細胞、T、B細胞、粒細胞、NK細胞）和非免疫細胞（上皮細胞、纖維細胞、肌細胞、Kuppfer細胞等）。TNFα的合成受到很多因素的影響。其生理功能早認為是有抗腫瘤活性，現在已明確不僅能調節腫瘤細胞的生長，對很多細胞的生長、分化和代謝都有影響。TNFα是免疫宿主反應的快速反應因子。其另一特點是在免疫疾病中有理性作用。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。

試劑配制:
1、犬腫瘤壞死因子αElisa Kit多少錢酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事項：
1加樣：
①犬腫瘤壞死因子αElisa Kit多少錢實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結果要在15-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。
?現貨供應　天冬氨酸酰酶3(ACY3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

現貨供應　天冬酰胺內肽酶(LGMN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　含銅胺氧化酶3(AOC3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　主要穹窿蛋白(MVP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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操作步驟：
1）犬腫瘤壞死因子αElisa Kit多少錢運用前，將所有試劑充沛混勻。不要使液體發生很多的泡沫，防止加樣時參加很多的氣泡，發生加樣上的差錯。
2）依據待測樣品數量加上規范品的數量決議所需的板條數。每個規范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據自個的數量來定，能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內。
3）參加稀釋好后的規范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。
5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。
7）每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8）取出酶標板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應當即測定成果。
9）在450nm波利益測定各孔的OD值。