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犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2019-03-20 10:31:08瀏覽次數(shù):211次

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產(chǎn)地 進口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
樣本保存:請盡早檢測,2-8℃保存一天;需更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集樣本,請將樣本及時分裝標(biāo)號后,置-20℃或-70℃保存;3、請?zhí)崆案嬖V我們:犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書說明書樣本的種屬、樣本數(shù)量、待測指標(biāo)及其他特殊要求。

試劑配制:
1、犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書

 Canine CTnI ELISA Kit

48T/96T

犬肌鈣蛋白I(CTnI)Elisa KitCanine CTnI ELISA Kit
犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書【實驗用途】CTnI肌鈣蛋白I,TnI是肌肉舒縮的分子開關(guān),當(dāng)胞漿內(nèi)鈣離子濃度較低時,TnI的抑制區(qū)域(C末端12個氨基酸;cTnI137-148)與肌動-原肌球蛋白緊密結(jié)合,橫橋三磷酸腺苷酶(ATPase)失活,細肌絲被關(guān)閉,肌肉處于舒張狀態(tài)。當(dāng)鈣離子濃度升高到一定程度時, TnC與鈣離子結(jié)合,導(dǎo)致其構(gòu)型發(fā)生改變,并將此效應(yīng)傳遞到肌鈣蛋白,TnI的構(gòu)型隨之發(fā)生改變,與肌動-原肌球蛋白脫離,抑制作用被解除,橫橋ATPase被激活,細肌絲發(fā)生滑動,肌肉表現(xiàn)出收縮性。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

 


操作步驟:
1)犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書運用前,將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫,防止加樣時參加很多的氣泡,發(fā)生加樣上的差錯。
2)依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個規(guī)范品和空白孔主張做復(fù)孔。每個樣品依據(jù)自個的數(shù)量來定,能運用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3)參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,悄悄振動混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
5)每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
7)每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8)取出酶標(biāo)板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測定成果。
9)在450nm波利益測定各孔的OD值。
注意事項:
1加樣:
犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。
公司犬肌鈣蛋白IElisa Kit說明書采用的全是進口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強,無效包退包換,公司提供免費代測服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。點擊了解更多其它elisa kit。
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