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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>RNA/DNA提取>>蛋白質(zhì)研究>> 包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)

包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)

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更新時(shí)間:2019-03-06 14:27:14瀏覽次數(shù):2814次

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包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)根據(jù)要保存的各樣本的體積,計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍(如100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。

包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)介紹:

DNA提取流程圖:
?公司包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更蛋白質(zhì)研究
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
問(wèn):常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得  DNA  純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問(wèn):長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題?
答:包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5   kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見(jiàn)現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題:
    1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
    2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹(shù)脂上洗脫下來(lái),建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
    3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷,如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
注意事項(xiàng):
● 包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類沒(méi)有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒(méi)有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2MIP-2定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人S00蛋白S-00定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人結(jié)蛋白Des定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人髓磷脂堿性蛋白MBP定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人β淀粉樣蛋白-40Aβ-40定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人N-乙酰基-絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴氨酰-脯氨酸AcSDKP定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人α乳清蛋白α-La定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人β2糖蛋白β2-GP定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人淀粉樣前體蛋白βAPP定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白β-Cat定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人β乳球蛋白β-Lg定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人阿拉伯半乳糖蛋白AGPs定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人表面活性蛋白DSP-D定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人波形蛋白VIM定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人玻連蛋白/體外粘連蛋白VN/CD5+CD6定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人空泡毒素相關(guān)蛋白AVacA定量檢測(cè)試劑盒

免疫測(cè)定  現(xiàn)貨供應(yīng) 人高速泳動(dòng)蛋白7HMG-7定量檢測(cè)試劑盒
包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞,769-P細(xì)胞

人十二脂腸腺癌,HUTU-80細(xì)胞

人食管癌細(xì)胞,EC9706細(xì)胞

人食管癌細(xì)胞,Eca-109細(xì)胞

人食管癌細(xì)胞,TE-1細(xì)胞

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人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞,ARPE-19細(xì)胞

 

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