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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 8號染色體開放閱讀框12抗體 |
英文名稱 | C8orf12 |
貨號 | BJ-K8137 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Standard cou agar標準計數瓊脂成纖維細胞cDNA鹽酸替羅非班HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene) 人巨細胞病UL23抗原
Standard nutrie agar標準I營養瓊脂人臍靜脈內皮細胞cDNAL-別異亮氨酸DAD1 (dopamine D1 receptor) 多巴胺受體-D1抗原
Standard nutrie broth 標準I營養瓊脂人臍動脈內皮細胞cDNACryoliteDRD3 receptor(dopamine D3 receptor) 多巴胺受體-D3抗原
Standard 11 nutrie agar標準11營養瓊脂人臍靜脈平滑肌細胞cDNACryoliteDRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原
Staphylococcus enrichme broth( base)acc.to BAIRD葡萄狀球菌富集肉湯(基礎)人臍動脈平滑肌細胞cDNA氟化鋁三水合物DRD5 receptor(dopamine D5 receptor) 多巴胺受體-D5抗原
TB medium acc.to LOENSTIN-JENSEN( base) TB培養基(基礎)人腦微血管內皮細胞總RNAN-乙酰-D-蛋氨酸DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羥化酶(抗原)
TCBS agar Vibrio selective agar TCBS瓊脂/弧菌選擇瓊脂人腦血管平滑肌細胞總RNAN-乙酰-D-蛋氨酸DCC (Deleted in colorectal cancer gene) 結直腸癌缺失基因抗原
Test agar fo the residue test acc.to KUNDRAT測試瓊脂(殘余測試)人腦血管周細胞總RNA2,3-二溴酰胺DCX(Doublecortin) 雙皮質素抗原
ILT2/CD85j/FITC 熒光素標記細胞表面免疫球蛋白樣轉錄因子2IgGCD8β鏈(CD8-β)3-氟-4-羥基甲酸Rat GALR4 (Galanin Receptor4) 檢測試劑盒
ILTV/FITC 熒光素標記抗雞傳染性喉氣管炎病IgG6號染色體開放閱讀框11-氯-2-氟-4-Rat IL-2Rβ (Ierleukin-2 Receptor-β) 檢測試劑盒
IMP3/FITC 熒光素標記胰島素樣生長因子ⅡmRNA結合蛋白3IgGγ晶狀體蛋白S/γS-crystallin1-氯-2-氟-4-Rat PGA (Pepsinegen A) 檢測試劑盒
ING1/p33/FITC 熒光素標記生長抑制因子基因1IgG9號染色體開放閱讀框72三氟甲氧基基異酸酯Rat PGC (PepsinegenC) 檢測試劑盒
Inhibin Alpha/FITC 熒光素標記抑制素αIgG鈣粘附分子10三氟甲氧基基異酸酯Rat -Pro-ANP (N-Terminal Pro-Atrial Natriuretic Peptide) 檢測試劑盒
Inhibin BetaA/FITC 熒光素標記抑制素βAIgGR Cadherin/CDH4三氟甲氧基基異酸酯Rat PINP (Procollagen Type I N-Terminal Propeptide) 檢測試劑盒
Inhibin Beta B /FITC 熒光素標記抑制素βBIgG大鼠細小病H-1株(H-1)1-氟-4-Rat Rt3 (Reverse Triiodothyronine) 檢測試劑盒
Inhibin Beta C /FITC 熒光素標記抑制素βCIgG22號染色體開放閱讀框91-氟-4-Rat TGM2 (Transglutaminase 2, Tissue) 檢測試劑盒
8號染色體開放閱讀框12抗體中華芽孢桿Mouse FOS (V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog) Kit
枯草芽孢桿Mouse VASPIN (Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) Kit
山楂生葉點霉Mouse VF (Visfatin) Kit
巴氏醋桿Mouse vWF (von Willebrand Factor) Kit
產氨短桿Mouse α Manase (α mannosidase) Kit
葡紫紅菇Mouse α1-AGP (α1-Acid glycoprotein) Kit
紫紅曲霉Mouse α1-MG (α1-Microglobulin) Kit
凍土毛霉原變型Mouse α2-AP (α2-Aiplasmin) Kit
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