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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖代謝系列>> 濾紙酶測(cè)試盒微量法
貨號(hào) | BJ-01611251-1 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
濾紙酶測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/48樣 | BJ-01611251-1 |
商品介紹:
測(cè)定意義 纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,濾紙酶是其中的一個(gè)組分,研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。 測(cè)定原理 濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物,在540nm處有最大光吸收,在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比,可測(cè)定計(jì)算得濾紙酶的活力。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線(xiàn)粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋?zhuān)划?dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白抗體球形賴(lài)ansuan芽孢桿菌大鼠胰島su自身抗體elisa檢測(cè)試劑盒
2型神經(jīng)纖維瘤抗體近平滑假絲酵母大鼠白介su15elisa檢測(cè)試劑盒
膜相關(guān)磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體波蘭青霉大鼠血小板因子4elisa檢測(cè)試劑盒
納曲酮抗體IgG緩慢葡萄球菌大鼠間粘附分子2elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化分化相關(guān)基因NDRG1抗體釀酒酵母大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化分化相關(guān)基因NDRG1抗體植物乳桿菌大鼠白介su16elisa檢測(cè)試劑盒
泛su連接酶NEDD4-2抗體赤曲霉大鼠白介su17elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化2型神經(jīng)纖維瘤抗體黑烏霉大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化谷ansuan受體1抗體煙色毛霉大鼠載脂蛋白B100elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化谷ansuan受體1抗體嗜熱鏈球菌大鼠P53elisa檢測(cè)試劑盒
神經(jīng)束蛋白186抗體Aquibacillus halophilus大鼠乙脫氫酶elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化泛su連接酶NEDD4-2抗體角鱗灰鵝膏菌大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1elisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體鐮孢菌大鼠白介su1βelisa檢測(cè)試劑盒
磷suan化谷ansuan受體1抗體泡囊短波單胞菌大鼠白介su5elisa檢測(cè)試劑盒
類(lèi)固受體激活蛋白2抗體溜曲霉大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7elisa檢測(cè)試劑盒
濾紙酶測(cè)試盒微量法集落激因子2受體β (CSF2Rβ)試劑盒Anti-SLK AntibodyAlexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗牛IgG
核孔蛋白188kda(NUP188)試劑盒Anti-SMAD1 AntibodyPE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG
趨化su樣因子超家族成員4(CKLFSF4)試劑盒Anti-SMAD1 AntibodyPE-Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG
促血管生成su2(ANG2)試劑盒Anti-SLPI AntibodyCy7標(biāo)記的羊抗牛IgG
C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)試劑盒 Anti-Smad1/2/3/5 Antibody性磷suan酶(AP)標(biāo)記的羊抗牛IgG
水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒 Anti-Smad1/2/3/5 Antibody膠體金標(biāo)記的羊抗牛IgG
XI型膠原α1(COL11α1)試劑盒 Anti-Smad1/2/3/5 AntibodyCy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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