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貨號	BJ-0161151-1

產品簡介：

產品名稱：線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒熒光法
規格：100管/96樣
貨號：BJ-0161151-1

檢測方法：熒光法

產品分類：氧化與抗氧化系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質期：6個月

商品介紹：

測定意義：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下，細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態，細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

操作步驟:

本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

促黃體激su誘導蛋白5抗體山性膠電泳液 ,10×250mL規格

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磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體松生莖點霉硫酸葡聚糖1g規格

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磷酸化磷酯酶Cβ3抗體果生鏈核盤菌miRNA 尿su -PAGE 上樣液 ,6×10mL

磷酸化染色體結構維持蛋白質１抗體大腸埃希氏菌(大腸桿菌)DNA 電泳分子量標準（100-600 bp）50 次規格

依賴鈉鈣交換蛋白6抗體弗氏假絲酵母4mL DNA 離心超濾管（90-150 KD）1個

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磷酸化多配體聚糖4(Ser179)抗體根瘤菌屬一站式 DNA 尿su -PAGE 電泳套裝30 次

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線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒熒光法肌球蛋白重鏈9(MYH9)試劑盒 Anti-EYA4 Antibody磷酸化核糖體S6激酶RSK2

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腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒Anti-EWSR1 Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

肝配蛋白A1 (EFNA1)試劑盒Anti-EVA1A Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

金屬硫蛋白3 (MT3)試劑盒Anti-EZH2 Antibody磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1

雌受體β(ERβ)試劑盒 Anti-F2 Antibody磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1
特點:

(1)應用廣泛

由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應學科的發展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究,使許多元素的摩爾吸光系數由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當的顯色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。

(4)準確度高

對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內,如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經預富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速