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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 卷曲螺旋結構域蛋白75抗體 |
英文名稱 | CCDC75 |
貨號 | BJ-K8388 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
CT DNA (calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA 肉桂酸1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽Human MFAP4 (Microfibrillar Associated Protein 4) 檢測試劑盒
CTGF 結締組織生長因子蘆薈苷L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽Human Bcl2L11 (Bcl-2 Like Protein 11) 檢測試劑盒
CD150/SLAM 信號淋巴細胞活化分子CD150桉油精L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽Human BALP (Bone Alkaline Phosphatase) 檢測試劑盒
CD151/MER2/PETA-3 CD151檀香油N-乙酰-D-纈氨酸Human BMP-1 (Bone Morphogenetic Protein 1) 檢測試劑盒
CD155/PVR 脊髓灰質炎病受體4-甲氧基N-乙酰-D-纈氨酸Human BMP-10 (Bone Morphogenetic Protein 10) 檢測試劑盒
CTLA-4/CD152 細胞性T細胞抗原-4對二甲氨基甲2-氨基-6-甲氧基吡啶Human BMP-15 (Bone Morphogenetic Protein 15) 檢測試劑盒
CTR1/Calcitonin receptor 降鈣素受體對羥基甲酸丁酯2-氨基-6-甲氧基吡啶Human BMP-6 (Bone Morphogenetic Protein 6) 檢測試劑盒
Cullin/C10orf46 CULLIN防己諾林堿N,N-二正丁基尿素Human BMPR1A (Bone Morphogenetic Protein Receptor, type IA) 檢測試劑盒
前列腺素氧化環化酶1Porcine COL17 (Collagen Type XVII) 檢測試劑盒
Ⅰ型膠原Porcine MMP-11 (Matrix Metalloproteinase 11) 檢測試劑盒
Ⅴ型膠原Porcine IGFBP-5 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5) 檢測試劑盒
Ⅹ型膠原Porcine PTGIS (Prostaglandin I Syhase) 檢測試劑盒
周期素FPorcine TIMP-4 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 4) 檢測試劑盒
泛素連接酶CUL7蛋白Porcine CX40 (Connexin 40) 檢測試劑盒
甲狀腺受體相互作用蛋白15Porcine COL10 (Collagen Type X) 檢測試劑盒
信號轉導蛋白亞基6Porcine FGF6 (Fibroblast Growth Factor 6) 檢測試劑盒
卷曲螺旋結構域蛋白75抗體石狀青霉Porcine CPR (Cytochrome P450 Reductase) Kit
灰樹花Porcine GDF9 (Growth Differeiation Factor 9) Kit
果蠅克魯維酵母Porcine ACP3/PAP (Prostatic Acid Phosphatase 3) Kit
云芝Porcine CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) Kit
白囊耙齒Porcine TGM1 (Transglutaminase 1, Keratinocyte) Kit
王氏薄孔Porcine PDE4D (Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) Kit
焦瑞身氏溶桿Porcine NUP107 (Nucleoporin 107kDa) Kit
冷彎曲Porcine SPC (Pulmonary Surfacta Associated Protein C) Kit
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