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抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
細胞周期蛋白N端結構域蛋白2抗體 | CNTD2 | BJ-K7963 |
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單抗的制備過程:
1.動物免疫:注射特定抗原蛋白
2.分離脾淋巴細胞:與培養好的骨髓瘤細胞混合,人工誘導細胞融合。
3.細胞融合:淋巴細胞雜交瘤的制備
4.雜交瘤細胞的篩選:HAT選擇培養基篩選出雜交瘤細胞。(含次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)的一種培養基,其中三種成分與細胞DNA合成有關,骨髓瘤細胞遺傳缺陷型,不能利用,被淘汰)
5.培養雜交瘤細胞:體外培養雜交瘤細胞,從培養液中分離提取單克隆抗體?;蛘?,將雜交瘤細胞移植到小鼠腹腔內,從小鼠腹水中分離提取單克隆抗體。
6.單克隆抗體的制備和凍存、純化?
實驗原理 :
(1)特異性結合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞,通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合,直接發揮中和病毒的作用。
(2)活補體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,參與免疫應答。
(4)產品僅用于科研可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
單克隆抗體:
1.概念:由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產生出的化學性質單一、特異性強的抗體。
2.特點:化學性質單一,特異性強,靈敏度高。
3.單克隆抗體的應用:
(1)診斷疾?。涸\斷病毒引起的疾病和用癌細胞抗原制備的單克隆抗體定位診斷。
(2)藥物導向治療:運用藥物與單克隆抗體連接在一起制成
(3)分離和純化抗原分子。
甲苯胺藍-DNA瓊脂脂肪細胞培養基表皮角化細胞ECG2 (sophagus cancer-related gene-2) 食道癌相關基因(抗原)
卵黃甘露高鹽瓊脂基礎前脂肪細胞培養基真皮成纖維細胞fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)
改良Giolitti-Cantoni 肉湯前脂肪細胞分化培養基軟骨細胞FLIP S/L peptide 凋亡調節基因之一(多肽抗原)
Vogel–Johnson 瓊脂基礎間充質干細胞培養基破骨細胞FoxP3 叉頭蛋白3-T細胞轉錄因子(多肽抗原)
哥倫比亞CNA瓊脂間充質干細胞成骨細胞分化培養基皮膚肥大細胞GAD-65 (glutamate decarboxylase) 谷氨酸脫羧酶-65(抗原)
堿性蛋白胨水(APW)間充質干細胞脂肪細胞分化培養基前脂肪細胞GAP-43 ( Growth associated protein-43 ) 生長相關蛋白-43(抗原)
堿性蛋白胨水(APW)平滑肌細胞培養基成骨細胞Gastrin 胃泌素(抗原)
堿性蛋白胨水(APW)神經細胞培養基腦動脈血管內皮細胞AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基?;o酶A消旋酶抗原
Melamine/Biotin 生物素標記兔抗三聚胺IgG過敏毒素C3(補體C3)2,5-二甲氧基二Rat Hp-IgM (Helicobacter Pylori IgM) 檢測試劑盒
GHR /FITC 熒光素標記生長激素受體IgG癌胚抗原相關細胞粘附分子1-甲基-L-組氨酸Rat PMP3 (Peroxisomal Membrane Protein 3) 檢測試劑盒
Ghrelin/FITC 熒光素標記腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)IgG細胞質多聚腺苷酸結合蛋白11-甲基-L-組氨酸Rat PPAR-γ (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ) 檢測試劑盒
GHRF/GHRH /FITC 熒光素標記生長激素釋放激素因IgG半胱氨酸蛋白酶抑制劑71-甲基-L-組氨酸Rat PPAR-α (Peroxisome Proliferators Activator Receptors alpha) 檢測試劑盒
GIP/FITC 熒光素標記胃泌素抑制肽IgG22號染色體開放閱讀框29BOC-L-4-氨酸Rat PI Ab-IgG/IgM (Phosphatidylinositol Antibody IgG/IgM) 檢測試劑盒
TNFRSF18/FITC 熒光素標記糖皮質激素誘導腫瘤壞死因子受體IgG神經細胞表面蛋白F3BOC-L-4-氨酸Rat P-PKC (Phospho Protein Kinase C) 檢測試劑盒
GIG8/ID2/FITC 熒光素標記DNA結合抑制因子2IgG組織蛋白酶CBOC-L-4-氨酸Rat PERK (Phospho-Extracellular Signal-Regulated Kinase) 檢測試劑盒
Glasses Snake poison Protein/FITC 熒光素標記抗眼鏡蛇蛇毒蛋白(眼鏡蛇)IgG半胱胺酸蛋白酶蛋白-4雙(三環己基磷)鈀(0)Rat PIKBα (Phospho-Inhibitory Subunit Of NF-KBα) 檢測試劑盒
細胞周期蛋白N端結構域蛋白2抗體多孢霉Mouse ITGB3 (Integrin Beta 3) Kit
諾爾斯氏鏈霉Mouse MIP-3β(Macrophage Inflammatory Protein 3β) Kit
乳酸乳球乳亞種Mouse MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) Kit
棘托竹蓀Mouse MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) Kit
假蒼白桿Mouse H4 (Histone H4) Kit
臭曲霉Mouse MHCI/H-2Ⅰ(Major Histocompatibility ComplexⅠ) Kit
*枯草芽胞桿Mouse MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ(Major Histocompatibility Complex-Ⅱ) Kit
球色單隔孢屬Mouse MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ(Major Histocompatibility Complex-Ⅲ) Kit
多克隆抗體定制:
當機體受到抗原刺激后, 產生免疫學反應,由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。 抗體的特異性取決于抗原分子的決定簇,各抗原分子具有許多抗原決定簇。因此,由它免疫動物所產生的抗血清實際上是多種抗體的混合物,稱為多克隆抗體。由于具有可識別多個表位、可引起凝集反應、沉淀反應等優點,產品僅用于科研被廣泛應用于免疫學診斷領域,。
(1)IgG :血清中含量,因此是重要的抗感染分子,包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG 還能激活補體,結合并增強巨噬細胞的吞噬功能(調理作用和 ADCC 效應),穿過胎盤,保護胎兒及新生嬰兒免受感染。
(2)IgA :分單體和雙體兩種。前者存在血清中,后者存在于黏膜表面及分泌液中,是黏膜局部抗感染的重要因素。
(3)IgM :是分子量大,體內受感染后早產生的抗體,具有很強的激活補體和調理作用,因此是重要的抗感染因子,且常用于診斷早期感染。
(4)IgD :主要存在于成熟 B 細胞表面,是 B 細胞識別抗原的受體。
(5)IgE :血清中含量少的抗體,某些過敏性體質的人血清中可檢測到,參與介導 I 型超敏反應和抗寄生蟲感染。
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