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人促卵泡素(FSH)elisa檢測(cè)試劑盒測(cè)試步驟:
(1)仔細(xì)切開(kāi)覆蓋在孔板上的箔片,從微孔板底部用手指輕輕頂出所用的孔板。注意不要損傷不使用的孔板上的條或孔,而且應(yīng)將其立即用塑料袋密封放入2-8℃的冰箱保存,以防止瓊脂變干;
(2)揭開(kāi)覆蓋在孔板上的箔片,每孔加入80mL牛奶樣品。并分別加入80mL的陰性和陽(yáng)性質(zhì)控,加入樣品時(shí)應(yīng)避免交叉污染;
(3)用密封膠將孔板密封,置于65℃恒溫箱或水浴箱中孵育直到陰性質(zhì)控轉(zhuǎn)化成淺黃綠色(參照每批質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告,大約需要1小時(shí)45分鐘)。
溫育實(shí)際測(cè)定操作中要注意以下幾點(diǎn):
1)要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。在臨床實(shí)驗(yàn)室中,通有將微孔板一放入溫箱即開(kāi)始計(jì)時(shí),造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái) 。南方冬季室內(nèi)溫度較低應(yīng)特別注意,此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠,以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性[3]。為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間,可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱所需時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。
2)溫育溫度的選擇。在有的ELISA試劑盒的說(shuō)明書(shū)中,指出溫育溫度可有兩種。從免疫測(cè)定的抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)來(lái)看,在較低的溫度下反應(yīng)較長(zhǎng)的時(shí)間zui為*。建議在臨床ELISA測(cè)定中盡量使用較低溫育溫度較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件。
3)“邊緣效應(yīng)”的排除。“邊緣效應(yīng)”指外周孔顯色較中心孔深,原因?yàn)?6孔板周孔與中心孔表面熱力學(xué)梯度不同。使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可排除“邊緣效應(yīng)”,且可提高測(cè)定重復(fù)性。
人促卵泡素(FSH)elisa檢測(cè)試劑盒盡量采用水浴,溫育中讓微孔板浮于水面上,或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈校庞跍叵渲?。這樣因板條孔底部直接與37℃水或濕布的接觸,水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度使反應(yīng)溶液的溫度迅速與溫室平衡。
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