小鼠 ELISA 檢測試劑盒方法

    小鼠 ELISA試劑盒是夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知小鼠 ELISA死因子濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將小鼠 ELISA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中小鼠 ELISA子的濃度呈比例關(guān)系。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1． 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

360pg/ml （5號標準品） 150ul的原倍標準品加入150ul的標準品稀釋液

180pg/ml （4號標準品） 150ul的5號標準品加入150ul的標準品稀釋液

90pg/ml （3號標準品） 150ul的4號標準品加入150ul的標準品稀釋液

45pg/ml （2號標準品） 150ul的3號標準品加入150ul的標準品稀釋液

22.5pg/ml （1號標準品） 150ul的2號標準品加入150ul的標準品稀釋液

0pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

 2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。