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365次TNF-a酶聯免疫試劑盒試劑盒的組成
96/48微孔板(1塊,已包被抗小鼠TNF-a單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、抗體工作液(1瓶)、酶標抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、終止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標準品(2000 pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標紙(1張)。
操作步驟
1、設立標準孔8孔(根據樣品蛋白濃度可調整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,孔再加標準品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復作對倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。
2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。
3、將反應板置于37 ℃×120 min。
4、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上扣干。
5、每孔中加入抗體工作液50ul。
6、將反應板充分混勻后置37 ℃×60 min。
7、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。
8、每孔加酶標抗體工作液100ul。
9、將反應板置于37 ℃ 120 min。
10、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。
11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗處反應5~10 min。
12、每孔中加入50ul終止液混勻。
13、用酶標儀在492 nm處測吸光值。
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