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細胞復蘇操作流程

時間:2025/3/31閱讀:174
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細胞復蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍,再培養傳代。細胞復蘇應采用快速融化的方法,這樣的目的是為了讓細胞外結晶在很短的時間內融化,從而避免慢悠悠的融化,使得水分滲入細胞內再結晶,從而對細胞再次造成傷害,從而影響細胞的存活率。

細胞復蘇操作流程:

1:細胞是凍在-80℃的環境里面的,所以拿出來后,應該盡快去37℃水浴鍋里解凍(我一般是放在PE手套里面,然后在37攝氏度的水域上快速融化。)這一步的操作不要超過一分鐘!

2:用預熱的培養基稀釋凍存的細胞(這步我會把融化的凍存液加入到15ml的管子里,加入3ml的預熱的培養液,在超凈臺里完成)

3:離心200g 5-10min,具體的離心的時間不同的細胞略有不同得具體得看培養的protocol

4:在離心以后,倒掉上清(因為凍存液里用DMSO, 它的作用是在凍存細胞時加入,加入的量大概是總體積的10%,起到防凍劑的作用,防止冷凍過程中細胞內形成冰晶。)

5:用預熱的培養液重懸細胞(根據培養的細胞皿的體積調整,我參照了GM12878,K562的培養protocol,剛開始的細胞密度不要超過10^6 /ML,但是細胞的密度也別太稀了,要不然長的會不好)

6:放到37℃,5%的二氧化碳培養箱中培養細胞。

PS:在看細胞凍存和復蘇的時候,有一個詞叫做“慢凍快融",所以在解凍細胞的時候,在加入預熱的培養基洗細胞之前,操作盡量的快,減少DMSO對細胞的傷害。我的凍存液的配方是:90%的FBS+10%的DMSO,凍存效果沒問題!


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