15000017673
當(dāng)前位置：上海邦景實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)剖析
PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)剖析:
1.預(yù)變性
模板DNAwan全變性與PCR酶的wan全激活對PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。
2.變性步驟
循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列wan全變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹di，易造成擴(kuò)增失敗。
3.引物退火
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴(kuò)增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實驗基礎(chǔ)上做出預(yù)估。退火溫度對PCR的特異性有較大影響。
4.引物延伸
引物延伸一般在72℃進(jìn)行（Taq酶最適溫度）。但在擴(kuò)增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴(kuò)增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設(shè)定為1min/kbp。
5.循環(huán)數(shù)
大多數(shù)PCR含25-35循環(huán)，過多易產(chǎn)生非特異擴(kuò)增。
6.最后延伸
在最后一個循環(huán)后，反應(yīng)在72℃維持10-30分鐘．使引物延伸wan全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，儀表網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
