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PCR反應出現(xiàn)非特異性擴增問題原因及對策

時間:2022/10/24閱讀:1770
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出現(xiàn)非特異性擴增:

PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。

1、  引物與靶序列不*互補或引物聚合形成二聚體。
2、 Mg2+離子濃度過高。
3、 退火溫度過低。
4、 PCR循環(huán)次數(shù) 過多有關(guān)。
5、 酶的質(zhì)和量,往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn),酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。
其對策有:必要時重新設計引 物。減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。降低引物量,適當增加模板量,減少循環(huán)次 數(shù)。適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性,65℃左右退火與延伸)。

 


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