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elisa檢測試劑盒實驗步驟詳解
1:留意試劑盒保存期,過保存期的試劑不能運(yùn)用。
2:評價試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品重復(fù)對比實驗,斷定試劑符合要求后方可運(yùn)用。
3:嚴(yán)厲把握顯色時刻,顯色時刻過短,參加停止液反應(yīng)停止后,底物結(jié)合物的量過少,易呈現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時刻后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后當(dāng)即顯色,不行報陽性,這可能是本底顯色的成果。
4:加樣要、快速。如果加樣不,酶生成物的量不能斷定,直接影響顯色成果。顯色的深淺及A值的測定與參加顯色劑和停止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)穩(wěn)重。要求在必定時刻內(nèi)加樣結(jié)束的實驗,如果加樣緩慢,便呈現(xiàn)差錯,并且試劑長時刻暴露在外,特別室溫過高時,保存期會縮短乃至失效。
5:檢驗技師應(yīng)具有從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能嫻熟操作實驗儀器、器械,具有必定總結(jié)和剖析問題的才干,對實驗中呈現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
6:運(yùn)用校對過的微量移液器,掃除自然差錯。移液器與否對定量檢測尤為重要。
7:仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)厲依照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不行混用。值得改善的當(dāng)?shù)兀貜?fù)實驗斷定建立后才干改善。
8:洗刷*,如若洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗刷液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳腐的洗刷液會呈現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能呈現(xiàn)假陽性。
9:嚴(yán)控反應(yīng)時刻,反應(yīng)時刻過長,酶失活;反應(yīng)時刻過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充沛結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松懈不結(jié)實,容易洗掉,都可能造成假陰性。
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