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上海晶抗生物工程有限公司


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公司動態

ELISA試驗操作過程

閱讀:148發布時間:2017-8-8

ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣:規范品設定5個濃度點10個孔,每個濃度設定平行孔,參加50微升不同濃度的規范品,空白孔設定1個孔參加50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗刷液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
4. 洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
5. 加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔在外。
6. 溫育:操作同2。
7. 洗刷:操作同4。
8. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
9. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉黃色)。
10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以內進行。

ELISA試劑盒注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗刷液可能會有結晶分出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響成果。
3. 各步加樣均應運用加樣器,并常常校正其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內,如標本數量多,*運用排槍加樣。
4. 請每次測定的一起做規范曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于規范品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,核算時請zui終乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性運用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格依照說明書的操作進行,試驗成果斷定有必要以酶標儀讀數為準.
8. 一切樣品,洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。

ELISA試劑盒核算:
以規范物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出規范曲線,依據樣品的OD值由規范曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用規范物的濃度與OD值核算出規范曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,核算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實踐濃度。        


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