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上海晶抗生物工程有限公司


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公司動態

ELISA試劑盒的操作應用范圍表現如下

閱讀:167發布時間:2017-6-12

ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚*千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大,可概括四個方面:

1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。

2、研究抗酶抗體的合成。

3、顯現微量的免疫沉淀反應。

4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

操作流程如下:

(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。

(2)酶標板置4℃,包被過一夜。

(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。

(6)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

(7)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。

(8)洗板,同(4)。

(9)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。

(10)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

(11)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

(12)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。


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