討論豬ELISA Kit白介素的標本請求
豬ELISA Kit白介素敏感性高,特異性強,重復性好的試驗診斷辦法,試劑安穩、易保留,操作簡潔,成果判別較客觀等要素,已廣泛應用在免疫學查驗的各領域中。
豬ELISA Kit白介素(IL-17)標本請求:
1.標本收集后盡早進行獲取,獲取按有關文獻進行,獲取后應盡快進行試驗。若不能立刻進行試驗,可將標本放于-20℃保留,但應防止重復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
豬ELISA Kit白介素操作過程:
1. 規范品的稀釋:本試劑盒供給原倍規范品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
20 ng/L 5 號規范品 150μl 的原倍規范品參加150μl 規范品稀釋液
10 ng/L 4 號規范品 150μl 的5 號規范品參加150μl 規范品稀釋液
5 ng/L 3 號規范品 150μl 的4 號規范品參加150μl 規范品稀釋液
2.5 ng/L 2 號規范品 150μl 的3 號規范品參加150μl 規范品稀釋液
1.25 ng/L 1 號規范品 150μl 的2 號規范品參加150μl 規范品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作一樣)、規范孔、待測樣品孔。在酶標包被板上規范品加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗刷液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔在外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序丈量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加停止液后15 分鐘以內進行。