ELISA試劑盒血清中有些細胞因子的檢出率很低，血清中又富含很多大分子雜蛋白，在血清濃度較高時簡單隱秘抗原的表位，因此在測血清原液經常出現負值。
這便是在我們的說明書中建議查看血清時做1:2稀釋的因素。
除TGF-B1、sICAM-1、MMP-9、TIMP-1等要做高倍稀釋外，其它一些細胞因子都要做1:2稀釋（這在我們的說明書中有提示）。
ELISA試劑盒實驗假如按上訴方法處理后查看仍有負值，則處理數據時能夠采用2個方法：
標準曲線只取標準曲線的下面4~5個點，即125，62.5，31.25，15.625，7.8，0，或62.5，31.25，15.625，7.8、3.9、0。
ELISA試劑盒實驗原則是把樣本的OD值全包含，標準曲線又能至少有4個點。
做法是：先在樣本孔中加50ul試劑稀釋液（試劑盒中已備），再加50ul樣本。
求出樣本含量后需要乘上稀釋倍數2。
這么改變后，一般樣本都能得到數據，低的樣本出來了，高的樣本含量也會高一些。
由于核算時是相對含量的比照，所以不會影響ELISA試劑盒實驗核算效果。
也便是把標準曲線的下端（即樣本含量會合的這一段）擴展，求出的數據更可靠。
人為的把“0”pg/ml點OD值降低。
ELISA試劑盒實驗原則是把“0”OD值降到比zui低的樣本OD略低一點，盡可能使樣本的含量滿是正值，一同保證改變“0”OD值后的標準曲線的相關系數（r）＞0.98。
