ELISA試劑盒斑點ELISA方法的首要操作程序為：
(1)載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加單調進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢查抗原適度稀釋后參加圈中，置37℃使硝酸纖維素膜*單調。每張7cm×2.3cm的膜通常可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。
(2) 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多選用富含正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
(3) 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再參加必定量適度稀釋的待檢血清，37℃反響必定時刻，用洗刷液洗三次，每次1－3分鐘。洗刷液通常為必定濃度的PBS-Tween溶液。
(4) 加酶標抗體，37℃反響必定時刻后，用洗刷液洗三次。
(5)顯色參加新鮮制作的底物液，37℃反響必定時刻后，去掉底物液，加蒸餾水洗刷中止反響。
(6) 作用斷定 以陽性、陰惡血清作為對照，膜片基地呈現深棕赤色斑駁者為陽性反響，否則為陰性反響。
ELISA試劑盒斑點ELISA(酶聯免疫吸附實驗,酶聯免疫試劑盒)（Dot-ELISA(酶聯免疫吸附實驗,酶聯免疫試劑盒)） 與慣例的微量板ELISA(酶聯免疫吸附實驗,酶聯免疫試劑盒)對比，Dot-ELISA(酶聯免疫吸附實驗,酶聯免疫試劑盒)具有簡練、節省抗原等利益，而且作用可長時刻保留；但其也有缺少，首要是在作用斷定上對比片面，特異性不行。
