ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)便是用酶(如辣根過(guò)氧化物酶)符號(hào)已知抗體(或抗原)，然后與組織標(biāo)本在必定條件下反應(yīng)，假如組織中含有相應(yīng)抗原(或抗體)，抗原抗體互相聯(lián)絡(luò)構(gòu)成的復(fù)合物中所帶酶分子遇到底物時(shí)，能催化底物水解、氧化或恢復(fù)，發(fā)作顯色反應(yīng)，這么就可以識(shí)別出標(biāo)本抗原(抗體)分布的方位和性質(zhì)，通過(guò)圖像分析并可抵達(dá)定量的目的。
ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)與免疫熒光技術(shù)
免疫熒光技術(shù)雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研討與確診，可是熒光抗體染色標(biāo)本不能*保存，對(duì)組織細(xì)胞的纖細(xì)結(jié)構(gòu)分辯不清，免疫酶技術(shù)則能打敗上述缺少，符號(hào)免疫酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對(duì)白臘切片標(biāo)本尤為適用，為免疫病理研討拓荒了一條新途徑，酶顯色產(chǎn)品具有較高的電子密度，通過(guò)恰當(dāng)處理還可以進(jìn)行免疫電鏡調(diào)查，免疫酶組化技術(shù)分為酶符號(hào)法與非符號(hào)抗體技術(shù)，前者是將酶通過(guò)交聯(lián)劑聯(lián)絡(luò)在抗體分子上，構(gòu)成酶符號(hào)抗體。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體聯(lián)接進(jìn)行的免疫反應(yīng)，稱為非符號(hào)抗體酶技術(shù)。
ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)運(yùn)用酶催化底物反應(yīng)的生物擴(kuò)展效果，前進(jìn)特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢查敏感性的一種符號(hào)免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶請(qǐng)求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)安穩(wěn)、來(lái)歷豐盛、報(bào)價(jià)不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)安穩(wěn)，繼續(xù)保存著它的活性部分和催化才干。在受檢標(biāo)本中不存在與符號(hào)酶相同的酶。其他它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，報(bào)價(jià)低價(jià)，有色產(chǎn)品易于測(cè)定，光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體選用免疫酶技術(shù)
免疫酶技術(shù)的首要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號(hào)的抗原或抗體和與符號(hào)酶直接相關(guān)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的功用，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保存正本的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種方法，在測(cè)定進(jìn)程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)，加之它的報(bào)價(jià)低價(jià)，所以被遍及選用。
聚苯乙烯載體的形狀首要有三種：小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特色是還能兼作反應(yīng)的容器，終究放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，外表經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特其他洗刷器，在洗刷進(jìn)程中使圓珠翻滾淋洗，效果十分好。zui常用的載體為微量反應(yīng)板，于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱為ELISA板，用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢查，有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特色是可以一同進(jìn)行大量標(biāo)本的檢查，并可在特定的比色計(jì)上敏捷讀出效果?，F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢查，包括加樣、洗刷、保溫、比色等過(guò)程，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
出色的ELISA板應(yīng)該是吸附功用好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間功用鄰近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不相同和制作工藝的不相同，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在運(yùn)用前須檢查其功用。常用的檢查方法為：以必定濃度的人IgG（一般為10ng／ml）包被ELISA板各孔后，每孔內(nèi)參與恰當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗刷，加底物顯色，中止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度?？刂品磻?yīng)條件，使各讀數(shù)在0.8左右。核算全部讀數(shù)的均勻值。全部單個(gè)讀數(shù)與均勻讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特色為質(zhì)軟板薄，可切開，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附功用比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。
為比較不相同固相在某一ELISA測(cè)定中的好壞，可用以下方法加以查驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后，ELISA試劑盒在不相同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作過(guò)程進(jìn)行測(cè)定，然后比較測(cè)定效果。在哪一種載體上陽(yáng)性效果與陰性效果區(qū)別zui大，這種載體便是這一ELISA測(cè)定的zui合適的固相載體。
ELISA試劑盒除塑料制品外，固相酶免疫測(cè)定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類測(cè)定方法將在本章“膜載體的酶免疫測(cè)定"中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應(yīng)時(shí)固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應(yīng)的速率，反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵招引作為分其他手法，洗刷也十分便當(dāng)，但需配備特其他儀器。