ELISA試劑盒每個標本量搜集體積＝50ul×檢測品種，如要做復孔，標本量搜集體積＝50ul×檢測 品種×2 。關于作某一個詳細目標來說，先用一系列稀釋度作一批標本測定，ELISA試劑盒得出對試驗有意義的一個稀釋度（即測定劑量反響曲線），然后用一個zui適稀釋度測定即可。
搜集標本前有必要清楚要。對搜集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃ 備用，如有特別原因需求周期搜集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。防止重復凍融。標本2-8℃ 可保存48 小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需增加*。
ELISA試劑盒血清標本搜集時，應注意防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質， 以 HRP 為符號的ELISA試劑盒測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
為了確保尿液檢測成果的準確性，有必要正確搜集尿液標本和保存。盛尿容器要清潔枯燥。
運用一次性的容器（如塑料尿杯），防止因用藥并清洗不潔凈而形成的污染，影響檢 測成果。尿液標本有必要新鮮，留取后，應及時檢測或保存，防止細菌繁衍。因在室溫中久 置后（尤其是夏日）尿中磷酸鹽等可分出結晶而干擾檢測。
標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會發生假陽性反響。 保存過久可發生聚合在 ELISA 中可使本底加深。
凍住標本融解后，蛋白質部分濃縮，分布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛 倒混和，不要在混勻器上強烈振動。
ELISA試劑盒混濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，ELISA試劑盒澄清后再檢測。