ELISA試劑盒目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后常可呈現呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構成和試驗的條件不一樣而異，因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當提高溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時刻應按規則力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行，時刻通常不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反響時刻，及時判別。
ELISA試劑盒OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，ELISA試劑盒再延伸反響時刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反響結束時參加停止液停止反響。OPD產品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上，邊反響調查成果。但為確保試驗成果的穩定性，宜在規則的恰當時刻閱覽成果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色維持較長時刻(12-24小時)不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。