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大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫組化試劑盒

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大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫組化試劑盒,該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性抗體抗原。有50T和100T兩種規(guī)格,歡迎新老客戶前來(lái)咨詢訂購(gòu)。

大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫組化試劑盒 
該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性抗體 抗原。該試劑盒具有靈
敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的 一抗與相應(yīng)靶抗原
結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,zui后加入HRP-SA,形成抗原—特異
一抗—*化二抗—HRP-SA 復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。
大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫組化試劑盒 ,試劑盒所含試劑:
試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
試劑B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
試劑C (*分裝)已稀釋的即用型p38 一抗(2.5ml)
試劑D (*分裝)*化羊抗兔IgG 1 支
(濃度1.5 mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)100 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA 復(fù)合物1 支(濃度1 μM,稀釋比1:50~1:200)100 μL
試劑F DAB 顯色液 5 ml
用戶自備試劑:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
三羥基氨基甲烷1.21g

加蒸餾水800mL,濃鹽酸調(diào)pH 值至7.2~7.4,zui后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積比)
2.抗原修復(fù)液(依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液)
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸0.38g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水900mL,濃鹽酸調(diào)pH 值至6.0,zui后定容至1000mL
或:0.5M EDTA 修復(fù)液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水700mL,用10mM NaOH 調(diào)pH 值至8.0,zui后定容至1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蠟包埋組織切片免疫染色
實(shí)驗(yàn)步驟(建議方案):
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無(wú)水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說(shuō)明書*方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達(dá)到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見(jiàn)附1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進(jìn)入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用試劑C 稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37
℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用DAB 溶液(試劑F)顯色;
15.復(fù)染:自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項(xiàng):
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來(lái)水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween 20,否則會(huì)
影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封
片。
附1:
  ,抗原修復(fù)方法
常用抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復(fù)液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修復(fù)法
切片脫蠟水化處理,TBS 沖洗,在組織上滴加*或*,37℃孵育
20~30min 后TBS 沖洗即可。
二、微波抗原修復(fù)法
微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或高檔繼續(xù)微波10~15min,取出微波
盒冷卻至室溫后,自來(lái)水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時(shí)間存在差異,
須自行調(diào)整。
三、直接高壓抗原修復(fù)法
取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復(fù)
液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計(jì)時(shí)1.5~2.5min 即可脫離熱源,自
然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。
四、隔水式高壓抗原修復(fù)法
不銹鋼高壓鍋中加自來(lái)水加熱至沸騰,微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸
騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計(jì)時(shí)
4~8 min 即可關(guān)閉熱源,自然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗,取出切片。此方法適用
于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。

YS01785BRat Toll-like receptor 9,TLR-9 Elisa試劑盒 

YS01786B大鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)免疫組化試劑盒Rat Lebtospira IgG Elisa試劑盒 

YS01787B大鼠熱休克因子1(HSF1)免疫組化試劑盒Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 Elisa試劑盒 

YS01788B大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)免疫組化試劑盒Rat cytochrome P450,CYP450 Elisa試劑盒

YS01789B大鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫組化試劑盒Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin Elisa試劑盒 

YS01790B大鼠內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑(vaspin)免疫組化試劑盒Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin Elisa試劑盒 

YS01791B大鼠溴脫氧核苷*(BrdU)免疫組化試劑盒Rat Bromodeoxyuridine,BrdU Elisa試劑盒 

YS01792B大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)免疫組化試劑盒Rat cytochrome P450 2E1,CYP2E1 Elisa試劑盒

YS01793B大鼠α1微球蛋白(α1-MG)免疫組化試劑盒Rat α1-microglobulin,α1-MG Elisa試劑盒

YS01794B大鼠過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)免疫組化試劑盒Rat peroxisome proliferators activator receptors alpha,PPAR-α Elisa試劑盒

YS01795B大鼠鈣調(diào)素(CAM)免疫組化試劑盒Rat calmodulin,CAM Elisa試劑盒 

 

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