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上海采佑實(shí)業(yè)有限公司
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犬傳染性肝炎病毒酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書

時(shí)間:2013/3/13閱讀:264
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本試劑盒僅供研究使用。 96T
藥品名稱:
通用名:犬傳染性肝炎病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒定性測(cè)定犬血液、或其它相關(guān)組織中傳染性肝炎病毒。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中傳染性肝炎病毒。用純化的
傳染性肝炎病毒抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中傳染性肝炎病毒抗原相結(jié)合,
經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的傳染性肝炎病毒抗體結(jié)合,形成抗
體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)
化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD
值),與CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中犬傳染性肝炎病毒的存在與否。
試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1/瓶8 陽(yáng)性對(duì)照0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 陰性對(duì)照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說(shuō)明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1 瓶12 密封袋1 個(gè)
標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本處理:血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)
2.標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè),可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月,
但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1
孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照(標(biāo)準(zhǔn)品)50μl。然后在待測(cè)
樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,
盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為傳染性肝炎病毒陰性
陽(yáng)性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為傳染性肝炎病毒陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月

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