在實際操作中,除了選擇優良的試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
現在讓我司錢為大家分析下ELISA實驗操作過程中影響結果的原因并給出了相對應的解決方法如下:
一:加樣
可能原因:
1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);
3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1.標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2.加樣后及時放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
二:孵育
可能原因:
1.孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2.孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1.貼封片或加蓋;
2.按說明步驟嚴格控制操作時間。
三:洗板
可能原因:
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3.反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法:
1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2.合理安排,或多用幾臺洗板機。
四:顯色
可能原因:
1.顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2.加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法:
1.顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
2.加樣時保持顯色劑不外流;
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