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進(jìn)行 ELISA 前制備樣品的提示

時(shí)間:2021/11/4閱讀:616
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樣品制備方法

細(xì)胞培養(yǎng)物上清液

將培養(yǎng)基移至離心管, 4℃, 1,500 rpm 離心 10 分鐘。

立即進(jìn)行上清液的分裝(血清)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)


細(xì)胞提取物

將組織培養(yǎng)板放置在冰上

吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS 輕輕洗滌細(xì)胞一次

吸出 PBS ,加入100 mm 培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液

收集細(xì)胞至在傾斜板中,然后移至經(jīng)過(guò)預(yù)冷的離心管中。

短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘

在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘,沉淀不溶性?xún)?nèi)容物

將上清液(這里是指可溶性細(xì)胞提取物)分裝至預(yù)冷的離心管中,并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。


條件培養(yǎng)基

將細(xì)胞接種到*(含血清)生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,使細(xì)胞增殖達(dá)到一定的融合率。

棄去培養(yǎng)基,數(shù)毫升預(yù)熱PBS 小心洗滌。重復(fù)洗滌步驟。

棄去PBS 洗滌液并小心加入無(wú)血清培養(yǎng)基。

孵育 1-2 天。

將培養(yǎng)基移至離心管, 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。

立即分裝上清液(血清)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

乳汁

收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。

分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

血漿

將全血收集到含抗凝劑的管中,例如 BD 抗凝真空采血管(目錄號(hào):363080/363080)或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積。4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

尿液

收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。

等分上清液(血清)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少凍融循環(huán)次數(shù)

唾液

收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘。 

立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

血清

將全血收集到未經(jīng)處理的測(cè)試管中,或者到不含抗凝劑的管中,如 BD 血清用真空采血管(目錄號(hào):367812)。

在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘。

4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘。

立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。


組織提取物

用干凈的工具解剖組織,最好在冰上、盡快進(jìn)行,以防止被蛋白酶降解。

將組織置于圓底的微量離心管中,并浸入液氮中進(jìn)行“速凍"。將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿。

對(duì)于約 5 mg 的組織片,可向管中添加約 300 µl *提取緩沖液(查看細(xì)胞/組織提取緩沖液配方),然后用電動(dòng)勻漿器勻漿。

清洗刀片兩次,每次清洗使用 300µl *提取緩沖液,然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時(shí)(例如置于冷室中的回旋振蕩器上)。

 4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上,將上清液(這里是指可溶的蛋白質(zhì)提取物)分裝至新、預(yù)冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

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