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ELISA試劑盒誤差概率如何縮小

時間:2020/5/21閱讀:1099
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   ELISA試劑盒實驗誤差概率如何縮小?在操作的過程中,我們除了需要多點細心之外,還有一些需要重點注意的地方,上海恒遠生物為您總結(jié)出了9個方面:

    方面一:檢驗技師
     應具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。

    方面二:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

    方面三:仔細閱讀說明書
     嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進。

    方面四:洗滌*
     洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。

    方面五:嚴控反應時間
     反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

    方面六:注意ELISA試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。

    方面七:評估試劑的實用性
     試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。

    方面八:嚴格掌握顯色時間
     顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。

    方面九:加樣要準確、快速
     如果加樣不準確,酶物的量不能確定,ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。

 

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