當前位置:上海滬鼎生物科技有限公司>>技術文章>>經典收藏版:豬ELISA試劑盒的影響
ELISA診斷試劑經歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。由于歷史的原因,人們往往以反應本底的好壞來衡量ELISA反應試劑盒,因此有些廠家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被,該類試劑盒的流行病學敏感度不夠,穩定性也成問題。
也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學地對待反應結果?;蚬こ炭乖^合成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA試劑盒來講,代產品為合成肽抗原,主要是HCV 特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是當時的基因工程抗原不全,僅包括了HCV的核心區片段;第三代產品基本上采用了基因工程抗原,而且這些抗原包括更多、更穩定、純度更高的HCV特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大提高了。
基因工程抗原與合成肽抗原的區別如下:
基因工程抗原是抗原基因在質粒載體中原核或真核表達的蛋白質抗原,多以大腸桿菌或 酵母 菌為表達系統。該類抗原與合成肽相比具有以下特點:
·分子量大
合成肽采用化學方法制備,由于工藝的局限,合成數量有限,只能達到數百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。
·穩定性好
包被的抗原的穩定性可使 試劑 盒的效期得到保證,早期以合成肽為包被抗原的 試劑 盒效期只有3-4 個月,采用基因工程抗原后效期大大延長了。
·基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達,表達產物包含更多的抗原決定簇,可提高 試劑 盒的靈敏度,提高檢出率。
·純化難度大
基因工程抗原的純化技術難度較大。
合成多肽抗原是根據蛋白質抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點:① 分子量太?。虎?一般只含有一個抗原決定簇;③ 純度高;④ 穩定性差。
國內乙肝兩對半試劑廠家較多;不同廠家出產的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別,資料顯示,不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%—99.3%,78%—89%存在較大差異。有的廠家酶標板孔間A值差大于15%;標記酶的活性及顯色液的穩定比較差。使用質劣的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一。
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