ELISA實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，操作者們所犯的問(wèn)題也各有不同。日前下午，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)趙老師到我司錢(qián)咨詢(xún)問(wèn)道：為什么ELISA標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)出現(xiàn)“溢值”的現(xiàn)象呢？看到問(wèn)題后，錢(qián)立即轉(zhuǎn)到技術(shù)部，5分鐘后，上海滬鼎公司技術(shù)部給趙老師去，解析造成ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品溢值的原因：
       

① 樣品/標(biāo)準(zhǔn)品不正確稀釋。
   

② 孵育時(shí)間/溫度不正確。
   

③ 在孵育時(shí)為蓋上酶聯(lián)板覆蓋物：在孵育時(shí)需蓋上酶聯(lián)板覆蓋物，以防止液體蒸發(fā)或孵育期間的污染。每個(gè)試劑盒內(nèi)均有足夠數(shù)量的酶聯(lián)板覆蓋物。
   

④ 檢測(cè)波長(zhǎng)不正確：要保證分光光度劑的檢測(cè)波長(zhǎng)是正確的。
   

⑤ TMB底物的顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：請(qǐng)監(jiān)控顯色時(shí)間。說(shuō)明書(shū)中所示的顯色時(shí)間可能因?yàn)闇囟群推渌鼨z測(cè)條件的不同而稍有變化。
   

⑥ 樣品不適合此檢測(cè)：在說(shuō)明書(shū)中會(huì)列出每種產(chǎn)品的適用標(biāo)本范圍，超出范圍的標(biāo)本可能不適于此試劑盒或者檢測(cè)條件需要摸索。
   

⑦ 樣品/標(biāo)準(zhǔn)品污染：樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的污染可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果“溢值”。
   

⑧ 偶合試劑不正確稀釋?zhuān)阂獓?yán)格按照說(shuō)明書(shū)來(lái)稀釋偶合試劑，濃度過(guò)高會(huì)造成OD的“溢值”HRP偶合試劑的不正確稀釋
   

⑨ 所用稀釋液不對(duì)：只能使用相應(yīng)試劑盒內(nèi)的稀釋液稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。
   

    找到問(wèn)題原因后，解決問(wèn)題就容易的多了。各位朋友們也是一樣，在檢測(cè)的時(shí)候一定要認(rèn)真仔細(xì)，并嚴(yán)格按照要求來(lái)操作。實(shí)驗(yàn)前，對(duì)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)仔細(xì)的閱讀。上海滬鼎祝大家實(shí)驗(yàn)成功！