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共享:培養(yǎng)基濕熱滅菌操作方法

時(shí)間:2018/1/31閱讀:1695
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    什么是培養(yǎng)基滅菌?為什么要滅菌?給培養(yǎng)基滅菌的方法有很多,如干熱滅菌、濕熱滅菌等。大多數(shù)的培養(yǎng)基滅菌都是使用濕熱滅菌法了,今天上海滬鼎與您共享培養(yǎng)基濕熱滅菌操作方法。
一、熱滅菌的主要原理
    1.微生物的熱阻
    2.對(duì)數(shù)殘存定律
    3.理論滅菌時(shí)間的計(jì)算
    4.滅菌溫度的選擇

 

二、影響滅菌效果的因素
    1.微生物種類(lèi):不同的微生物k值不同。
    2.初始菌量:在保持N值不變的前提下,t與初始菌量N0的對(duì)數(shù)成正比。
    3.培養(yǎng)基成份:油脂、蛋白質(zhì)增加微生物的耐熱性。
    4.傳熱與混合狀況:影響受熱均勻度。
    5.培養(yǎng)基中固體顆粒的存在影響熱穿透。
    6.蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和滅菌溫度。
    7.pH:酸性pH下可加快微生物熱死速率

三、培養(yǎng)基的工業(yè)滅菌
    1.實(shí)驗(yàn)室種子培養(yǎng)基滅菌方法
    ①高壓蒸汽滅菌鍋、 手提式滅菌鍋。容量小。
    ②立式或臥式滅菌鍋,容量較大,一般能裝幾十瓶或幾百瓶。
    ③滅菌柜,要和蒸汽鍋爐配套, 用于大量種瓶培養(yǎng)基的滅菌, 一次能裝幾百至幾千瓶(袋)。
    2.培養(yǎng)基的分批滅菌
    ①定義:將配制好的培養(yǎng)基輸入發(fā)酵罐中,用蒸汽加熱,使培養(yǎng)基和設(shè)備同時(shí)滅菌的一種滅菌方式,又稱(chēng)實(shí)罐滅菌。
    ②滅菌過(guò)程
    過(guò)程包括升溫、保溫和冷卻等三個(gè)階段,各階段對(duì)滅菌的貢獻(xiàn):20%、75%、5%。培養(yǎng)基的升溫可由兩種方式實(shí)現(xiàn):間接加熱,在夾套或蛇管中通入蒸汽加熱;直接加熱,在培養(yǎng)基中直接通入熱蒸汽加熱。
    滅菌過(guò)程中加熱和保溫階段的滅菌作用是主要的,而冷卻階段的滅菌作用是次要的,一般很小,可以忽略不計(jì)。此外,還應(yīng)指出的是,應(yīng)當(dāng)避免長(zhǎng)時(shí)間的加熱階段,因?yàn)榧訜釙r(shí)間過(guò)長(zhǎng),不僅破壞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而且也有可能引起培養(yǎng)液中某些有害物質(zhì)的,從而影響培養(yǎng)過(guò)程的順利進(jìn)行。
    在實(shí)際生產(chǎn)中,也可能遇到所供蒸汽不足、溫度不夠高的情況,這時(shí)可以適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。生產(chǎn)上甚至有用100℃蒸煮而達(dá)到*滅菌的實(shí)例。如要做固體曲而沒(méi)有高溫蒸汽時(shí),可將原料用100蒸汽蒸30min,殺死其中的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,但孢子與細(xì)菌的芽孢沒(méi)有被殺死。
    將蒸過(guò)的原料置于室溫下過(guò)夜,未被殺死的孢子便發(fā)芽生長(zhǎng),芽孢發(fā)育成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,再30min便可殺死。如此連續(xù)反復(fù)進(jìn)行2-3次,亦可達(dá)到*滅菌的目的。

    3.分批滅菌的操作
    分批滅歇是在所用的發(fā)酵罐或其他培養(yǎng)裝置中進(jìn)行的,它是在配制罐中配好培養(yǎng)基后,通過(guò)管道輸入發(fā)酵罐等培養(yǎng)設(shè)備中,然后開(kāi)始滅菌。在進(jìn)行培養(yǎng)基的間歇滅菌之前,通常先將發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置的分空氣過(guò)濾器進(jìn)行滅菌,并且用空氣將分過(guò)濾器吹干。開(kāi)始滅菌時(shí),應(yīng)先放去夾套或蛇管中的冷水,開(kāi)啟排氣管閥,通過(guò)空氣管向發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基通入蒸汽進(jìn)行加熱,同時(shí),也可在夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行間接加熱。
    當(dāng)培養(yǎng)基溫度升到70℃左右時(shí),從取樣管和放料管向罐內(nèi)通入蒸汽進(jìn)一步加熱,當(dāng)溫度升至120℃,罐壓為1 105Pa(表壓)時(shí),打開(kāi)接種、補(bǔ)料、消泡劑、酸、堿等管道閥門(mén)進(jìn)行排汽,當(dāng)然在保溫過(guò)程中,應(yīng)注意凡在培養(yǎng)基液面下的各種進(jìn)口管道都應(yīng)通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道則應(yīng)排放蒸汽,這樣才能不留死角,從而保證滅菌*。保溫結(jié)束后,依次關(guān)閉各排汽、進(jìn)汽閥門(mén),待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后,向罐內(nèi)通入無(wú)菌空氣,在夾套或蛇管中通冷水降溫,使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度,進(jìn)行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。
    由于培養(yǎng)基的間歇滅菌不需要專(zhuān)門(mén)的滅菌設(shè)備,投資少,對(duì)設(shè)備要求簡(jiǎn)單,對(duì)蒸汽的要求也比較低,且滅菌效果可靠,因此,間歇滅菌是中小型生產(chǎn)工廠(chǎng)經(jīng)常采用的一種培養(yǎng)基滅菌方法。
 

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