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什么是培養基滅菌?為什么要滅菌?給培養基滅菌的方法有很多,如干熱滅菌、濕熱滅菌等。大多數的培養基滅菌都是使用濕熱滅菌法了,今天上海滬鼎與您共享培養基濕熱滅菌操作方法。
一、熱滅菌的主要原理
1.微生物的熱阻
2.對數殘存定律
3.理論滅菌時間的計算
4.滅菌溫度的選擇
二、影響滅菌效果的因素
1.微生物種類:不同的微生物k值不同。
2.初始菌量:在保持N值不變的前提下,t與初始菌量N0的對數成正比。
3.培養基成份:油脂、蛋白質增加微生物的耐熱性。
4.傳熱與混合狀況:影響受熱均勻度。
5.培養基中固體顆粒的存在影響熱穿透。
6.蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和滅菌溫度。
7.pH:酸性pH下可加快微生物熱死速率
三、培養基的工業滅菌
1.實驗室種子培養基滅菌方法
①高壓蒸汽滅菌鍋、 手提式滅菌鍋。容量小。
②立式或臥式滅菌鍋,容量較大,一般能裝幾十瓶或幾百瓶。
③滅菌柜,要和蒸汽鍋爐配套, 用于大量種瓶培養基的滅菌, 一次能裝幾百至幾千瓶(袋)。
2.培養基的分批滅菌
①定義:將配制好的培養基輸入發酵罐中,用蒸汽加熱,使培養基和設備同時滅菌的一種滅菌方式,又稱實罐滅菌。
②滅菌過程
過程包括升溫、保溫和冷卻等三個階段,各階段對滅菌的貢獻:20%、75%、5%。培養基的升溫可由兩種方式實現:間接加熱,在夾套或蛇管中通入蒸汽加熱;直接加熱,在培養基中直接通入熱蒸汽加熱。
滅菌過程中加熱和保溫階段的滅菌作用是主要的,而冷卻階段的滅菌作用是次要的,一般很小,可以忽略不計。此外,還應指出的是,應當避免長時間的加熱階段,因為加熱時間過長,不僅破壞營養物質,而且也有可能引起培養液中某些有害物質的,從而影響培養過程的順利進行。
在實際生產中,也可能遇到所供蒸汽不足、溫度不夠高的情況,這時可以適當延長滅菌時間。生產上甚至有用100℃蒸煮而達到*滅菌的實例。如要做固體曲而沒有高溫蒸汽時,可將原料用100蒸汽蒸30min,殺死其中的營養細胞,但孢子與細菌的芽孢沒有被殺死。
將蒸過的原料置于室溫下過夜,未被殺死的孢子便發芽生長,芽孢發育成營養細胞,再30min便可殺死。如此連續反復進行2-3次,亦可達到*滅菌的目的。
3.分批滅菌的操作
分批滅歇是在所用的發酵罐或其他培養裝置中進行的,它是在配制罐中配好培養基后,通過管道輸入發酵罐等培養設備中,然后開始滅菌。在進行培養基的間歇滅菌之前,通常先將發酵罐等培養裝置的分空氣過濾器進行滅菌,并且用空氣將分過濾器吹干。開始滅菌時,應先放去夾套或蛇管中的冷水,開啟排氣管閥,通過空氣管向發酵罐內的培養基通入蒸汽進行加熱,同時,也可在夾套內通蒸汽進行間接加熱。
當培養基溫度升到70℃左右時,從取樣管和放料管向罐內通入蒸汽進一步加熱,當溫度升至120℃,罐壓為1 105Pa(表壓)時,打開接種、補料、消泡劑、酸、堿等管道閥門進行排汽,當然在保溫過程中,應注意凡在培養基液面下的各種進口管道都應通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道則應排放蒸汽,這樣才能不留死角,從而保證滅菌*。保溫結束后,依次關閉各排汽、進汽閥門,待罐內壓力低于空氣壓力后,向罐內通入無菌空氣,在夾套或蛇管中通冷水降溫,使培養基的溫度降到所需的溫度,進行下一步的發酵和培養。
由于培養基的間歇滅菌不需要專門的滅菌設備,投資少,對設備要求簡單,對蒸汽的要求也比較低,且滅菌效果可靠,因此,間歇滅菌是中小型生產工廠經常采用的一種培養基滅菌方法。
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