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技術重點:如何處理ELISA試劑盒的六大重點標本

時間:2015/11/17閱讀:1189
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    ELISA方法優點多,易操作,能夠檢測數種標本,因而廣受科研人員的歡迎。然而,能夠影響到ELISA實驗結果的因素有很多,其中就包括標本的處理。但是不同類型的標本處理方法不同,不同的標本應如何處理呢?上海滬鼎教您處理ELISA試劑盒的六大重點標本:
一、尿液、唾液 
    1000×g離心20min,取上清即可檢測。但由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,應保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應離心去除。為了保證檢測的準確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測;4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。
    注意:還應保證樣本不含NaN3,因為NaN3會抑制HRP的活性,從而導致假陰性的結果。
二、細胞裂解液
① 吸去培養板內的培養基,用胰酶消化細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
② 收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
③ 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
④ 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
三、細胞培養上清
    取細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
四、組織勻漿液
① 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質。
② 將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充分
③ 將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿)
④ 吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
五、血清
    用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一個晚上,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出)4℃1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
    注意:采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
六、血漿
    用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
 
    以上ELISA實驗的六大重點檢測標本的處理方法,你掌握了嗎?實驗標本的收集盒處理以及ELISA試劑盒實驗操作中都需要您認真對待與足夠的耐心。本公司可為您提供ELISA試劑盒免費代檢測服務,上海本地還可以上門取樣!

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